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第 五 章 DNA 的 生 物 合 成;术语简介;第一节 原核生物的DNA复制;半保留复制;重;新链;子链继承母链遗传信息的几种可能方式;二. 复制的起点和方向;●终点(terminus)：终止复制的序列位点. ●复制叉(replication fork)：复制开始后由于DNA双链解开，在两股单链上进行复制，形成在显微镜下可看到的叉状结构。;;A. 环状双链DNA及复制起始点 B. 复制中的两个复制叉 C. 复制接近终止点(termination, ter);原核生物：只有一个复制子 真核生物：多个复制子，多个起点，形成多个 “复制眼”或“复制泡”;5’;（二）起始点和方向 1. 原核生物和真核生物复制都是在DNA分子特定的位置起始的，如大肠杆菌起始点有固定的保守顺序GATC和TTATCCACA，多次出现，可被酶识别。;双向复制;复制起始点、复制子与复制叉（动画演示）;三. 原核细胞DNA的复制(DNA指导下的DNA合成);DNA聚合酶的反应特点： ? 4种dNTP底物：(dATP dGTP dCTP dTTP)； ? 接受模板指导: 解开成单链的DNA母链； ? 需引物提供3′-OH； ? 新链生长方向： 5′→3′； ? 产物DNA性质与模板相同。; 此外, DNA复制过程中还需其它酶和蛋白质因子.;1. 大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ— polⅠ 也称Kornberg酶, 是各种DNA聚合酶中研究 的最透彻的，它的一些特点代表了DNA聚合酶 的基本特点： （1） pol Ⅰ的性质 分子量：103 000，单链，球形，活性部位含 Zn2＋， 电镜下可以看到二聚体，每个细胞有400个酶分子。;功能：对复制中的错误进行校读，对复制和修复中出现的空隙进行填补。;323个氨基酸;（2）功能： ① 5′→3′聚合酶活性； 酶与模板结合后构象改变，识别碱基，正 确配对后才发挥聚合作用 ② 3′→ 5′外切酶活性； 主要是对新生DNA链进行校对，防止“错配” ③ 5′→3′外切酶活性。 主要是对DNA损伤的修复，以及在DNA复制 时RNA引物的切除及其空隙的填补 可见，DNA polⅠ是1个多功能酶;模 板;2. 大肠杆菌DNA聚合酶 Ⅱ——polⅡ (1) 多亚基, 聚合酶亚基 (单链) 分子量为88 000, 每个细胞有100个酶分子 （2）功能： ① 5′→3′聚合酶活性； ② 3′→5′外切酶活性。 （该酶无5′→3′外切酶活性;且活性低） 目前认为该酶主要参与DNA损伤的修复。;3. 大肠杆菌DNA聚合酶 Ⅲ——polⅢ 真正的DNA复制酶，1972年发现 （1）pol Ⅲ 是真正起复制作用的酶，由10种亚基组成不对称二聚体, α、ε、θ组成核心酶 （2）功能： ① 5′→3′聚合酶活性； ② 3′→5′外切酶活性。 该酶在原核细胞中主要负责DNA链的延伸，是 复制延长中真正起催化作用的酶。 (该酶无5′→3′外切酶活性);?;可滑动的 夹持器亚基;α亚基具有5′→3′方向合成DNA的催化活性 ε亚基具有3′→5′外切酶活性，起校对功能， 可提高聚合酶Ⅲ复制DNA的保真性 ? 亚基可能起组建的作用 β亚基犹如夹子，功能是识别引物、夹住DNA 分子向前滑动 ? 亚基起着促使核心酶二聚化的作用 其余的亚基构成 ?-复合物，主要功能是帮助 ? 亚基夹住DNA（也称夹子装置器），并有 增强核心酶活性的作用;DNA 聚合酶 polⅠ polⅡ pol Ⅲ 亚基数目 1 ≥7 ≥10 5 ′→3 ′聚合酶活性 + + + 3 ′→5 ′外切酶活性 + + + 5 ′→3 ′外切酶活性 + - - 聚合速度(核苷酸/分) 1 000-1 200 2