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饲料中有毒有害物质的测定ppt课件
饲料中有毒有害物质的测定; 9 饲料中有毒有害物质的测定P244; 9 饲料中有毒有害物质的测定;都是药残惹的祸!;“饲料鸡”; 9 饲料中有毒有害物质的测定; 9 饲料中有毒有害物质的测定; 9 饲料中有毒有害物质的测定; 9 饲料中有毒有害物质的测定; 9 饲料中有毒有害物质的测定;; 9 饲料中有毒有害物质的测定; 9 饲料中有毒有害物质的测定; 9 饲料中有毒有害物质的测定; 9 饲料中有毒有害物质的测定; 9 饲料中有毒有害物质的测定;酶联免疫吸附法
A、抗体
将某种抗原经各种途径免疫动物,成熟的B细胞克隆受到抗原刺激后,将抗体分泌到血清和体液中。实际上血清中的抗体是多种单克隆抗体的混合物,因此称之为多克隆抗体。;单克隆抗体是由生长在细胞培养物中的同一B细胞的群体(一个克隆)合成并分泌的、均一的、识别同一抗原表位的抗体。;酶联免疫吸附法
B、酶与底物:
在ELISA中,常用的酶为辣根过氧化物酶(horseradish? peroxidase,? HRP)和碱性磷酸酶(alkaline? phosohatase,? AP)。在少数商品ELISA试剂中,应用的酶尚有葡萄糖氧化酶、β-D-半乳糖苷酶和脲酶等。
辣根过氧化物酶底物:邻苯二胺(O-phenylenediamine,OPD)、四甲基联苯胺(3,3,5,5-tetramethylbenzidine,TMB)和ABTS。用2mol/L硫酸终止酶反应。
碱性磷酸酶底物:一般采用对硝基苯磷酸酯(p-nitrophenyl? phosphate, p-NPP)作为底物,用NaOH终止酶反应。 ;酶联免疫吸附法
B、酶与底物:
在ELISA中,常用的酶为辣根过氧化物酶(horseradish? peroxidase,? HRP)和碱性磷酸酶(alkaline? phosohatase,? AP)。在少数商品ELISA试剂中,应用的酶尚有葡萄糖氧化酶、β-D-半乳糖苷酶和脲酶等。
辣根过氧化物酶底物:邻苯二胺(O-phenylenediamine,OPD)、四甲基联苯胺(3,3,5,5-tetramethylbenzidine,TMB)和ABTS。用2mol/L硫酸终止酶反应。
碱性磷酸酶底物:一般采用对硝基苯磷酸酯(p-nitrophenyl? phosphate, p-NPP)作为底物,用NaOH终止酶反应。 ;酶联免疫吸附法
ELISA最常用的四种方法:
直接法测定抗原;
间接法测定抗体;
双抗体夹心法测定抗原;
竞争法测定抗原。 ;(1)? 直接法测定抗原
A.????? 将抗原吸附在载体表面;
B.????? 加酶标抗体,形成抗原—抗体复合物;
C. 加底物。底物的降解量=抗原量。 ;(2)间接法测定抗体
A.????? 将抗原吸附于固相载体表面;
B.????? 加抗体, 形成抗原-抗体复合物;
C.????? 加酶标抗体;
D. 加底物。 测定底物的降解量=抗体量。 ;(3)双抗体夹心法测定抗原
A.????? 将抗体吸附于固相表面;
B.????? 加抗原,形成抗原-抗体复合物;
C.???? 加酶标抗体;
E. 加底物。底物的降解量=抗原量。 ;(4)竞争法测定抗原
A.??将抗体吸附在固相载体表面;
B. 加入酶标抗原和待测抗原,竞争结合抗体; 对照只加入酶标抗原;
C. 加底物。对照孔与样品孔底物降解量的差=未知抗原量。;黄曲霉毒素B1酶联免疫竞争检测法 ;样品;微 孔 表 面 情 况;标准品;标准溶液;酶标抗原;酶标抗原;标准品, 样品 和 酶标抗原加进微孔;样品;标准品;孵育30分钟;微 孔 清 洗;洗涤5次,间隔2分钟;加入酶催化反应底物;;;;反 应 孔;阴 性 对 照 孔;阴性对照孔=没有黄曲霉毒素B1分子与酶标抗原竞争
所有抗体都与酶标抗原结合
;阳 性 对 照 孔;1 ng/ml 标准孔 = 黄曲霉毒素B1分子结合到抗体上
剩余的抗体再与酶标抗原结合
;;;;不同温度条件下的标准曲线;以相对吸光度值为纵坐标三种不同温度下的标准曲线
Y=A/A阴性孔;表1 公众对饲料质量重要性的认识的变化
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