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血液中TNF-α 、 TGF-β及ACE 的含量在预测放射性大鼠肺损伤动物模型中的价值 导师：刘文其副教授 2008级硕士研究身：袁堃 研究背景 胸部肿瘤在放疗过程中不可避免的使肿瘤临近正常肺组织受到照射，而肺是辐射的敏感器官，对照射耐受性较低，因而受照射时会产生不同程度的肺损伤，称为放射性肺病( radiation pneumopathy ,RP)。临床上RP有两种表现形式，即早期的急性放射性肺炎(acute radiation-induced pneumonitis，ARP)和后期的放射性纤维化(radiation-induced pulmonary fibrosis，RPF）。目前RP的治疗办法不多,尤其是RPF一旦发生就难以逆转,导致患者生活质量下降。因此,对RP的研究愈来愈受到人们的重视。 放射性肺损伤的发病机理的研究始于20世纪50年代，当时多为病理形态学观察。进入80年代后，集中于“关键靶细胞”的研究（归纳起来有几种学说：①肺泡上皮细胞损伤；②肺血管内皮细胞损伤；③肺泡巨噬细胞病毒参与等）。目前该领域研究已经进入分子生物学水平，其标志为细胞因子学说的提出，即细胞因子媒介的多细胞间的相互作用贯穿放射性肺损伤的全过程。 立论依据 众所周之，肺部照射的作用靶为：Ⅱ型肺泡细胞，血管内皮细胞，肺巨噬细胞，成纤维细胞。肺Ⅱ型细胞和内皮细胞受照射后，释放促炎性细胞因子（IL-1β，IL-6，TNF-α等），诱导巨噬细胞释放粗纤维化因子（TGF-β，PDGF等），并继而通过一系列自分泌和旁分泌过程刺激成纤维细胞增生和合成细胞基质蛋白，最终导致放射性肺损伤的产生。 放射性肺损伤发生发展过程中细胞因子的变化可以是导致损伤发生的原因或启动因素，也可以是损伤发生过程中的伴随变化，检测相关细胞因子的变化有望预测放射性肺损伤的发生或检测其发展过程，细胞因子还可以作为放射性肺损伤的干预靶点，预防放射性肺损伤的发生。 TNF-α: TNF-α是细胞因子调节网络的启动因子，在放射性肺炎的发生和维持过程中有着重要地位。在TNF-α的作用下，血管内皮细胞的反应性改变，引起微血管内凝血同时TNF-α发挥阳性化学趋化作用，诱导中性粒细胞、淋巴细胞等炎性细胞的渗出，启动炎性反应。此外，TNF-α引发IL-1、IL-6和MCP等其它细胞因子的合成释放，产生细胞因子的“瀑布效应”。因此，TNF-α在放射性肺炎的发病机制中起关键作用。 在Rube的放射性动物模型中，肺部接受照射后TGF-α、IL-1α和IL-6等炎性因子的表达存在一“双峰现象”。另外，有报导证实其可作为小剂量重复照射大鼠放射性肺损伤的监测指标之一。 TGF-β: TGF-β的活性和功能异常将导致纤维增生性疾病的发生，放射治疗后正常组织损伤其特征为间质细胞丢失和过度的纤维化。TGF-β在放射引起的正常组织损伤中的作用最早是通过对小鼠肝脏模型的研究证实的。结果显示，放射后TGF-β表达具有剂量依赖性关系。动物试验研究显示TGF-β与多种组织（皮肤，小肠，乳腺和肺等）照射后纤维化有关。 TGF-β是刺激成纤维细胞增殖分化、细胞凋亡和分泌细胞外基质的重要生长因子之一，其水平升高已被视为放射性肺损伤的标志之一。在众多的促放射性纤维化发生和形成介导因子中，被认为是最密切的。 ACE: 血管紧张素转化酶（ACE）以表面糖蛋白的形式存在于内皮细胞的管腔面，肺的毛细血管是体内最大的血管床，血液循环中的ACE多源于肺内皮细胞，肺内皮细胞ACE合成或分泌减少，肺血管形成异常或血液充沛等都会导致循环血液中ACE水平降低。ACE的生物学功能是将血管紧张素Ⅰ转化为血管紧张素Ⅱ，而后者是已知的致纤维化因子，能刺激核增殖因子ＮＦ－κB的表达，ＮＦ－κB可以调节IL-6，MCP-1等炎性因子的表达，血管紧张素转化酶抑制剂（ACEⅠ）能通过减少ＭＣＰ－１的产生，从而抑制了单核细胞及巨噬细胞的聚集及其活性，抑制ＴＮＦ－α的产生，抑制豚鼠肺巨噬细胞氧自由基的产生，抑制炎性反应和纤维化的发生。 中国医学科学院肿瘤医院的试验研究结果提示，血浆ACE含量可望作为放射性肺炎的预测指标。 　　　 研究目的 小剂量分次照射大鼠建立放射性肺损伤动物模型 探讨血浆中TNF-α 、 TGF-β及ACE在放疗过程中的含量变化与放射性肺损伤易感性的相关性,探讨其作为放射性肺损伤易感性指标的可能性 。 实验流程 材料与方法 1．1 实验动物：健康成年SPF级雌性Wistar大鼠224只，体重18O～200g。 1．2 分组：完全随机分为3组，照射2Gy/f组30只，照射10Gy/f组30只，正常对照组30只。 1．3 照射方法：采用60Co γ射线，照射右肺，铅块遮挡左肺及纵隔,铅块厚度10cm, SSD=lm，照射野2cm×3cm(