第4章 中药制的含量测定.ppt

黄芩苷加样回收试验结果  重复性测定数据表 （2）内标法：首先选择一个内标物，要求供试品中不存在且纯度高，化学性质稳定，在薄层上能与被测成分很好分开且其色谱不受其它成分色谱干扰，便于称量的物质。 准确称取一定量内标物分别加入供试品和对照品溶液中（加入量应接近被测成分含量），同一薄层板上展开，在薄层扫描仪上测定两者中内标物与被测成分的峰面积，用被测成分与内标物的峰面积比代替外标法中的被测成分峰面积，用被测成分与内标物的浓度比代替外标法中的被测成分浓度，计算。即： ①内标一点法：标准曲线过原点，C/Cs=F×A/As ②内标两点法：标准曲线不过原点，C/Cs=F1×A/As+F2, C、Cs分别是被测成分与内标物的浓度或量；A、As分别是被测成分与内标物的峰面积， F1是比例常数，F2是纵坐标截距。较先进仪器可自动给出，否则也可自己求算。 内标法可消除点样量不准产生的误差，但内标物不宜找且操作复杂，故不及外标法多用。 （3）回归曲线法：属计算机回归法，由回归方程计算供试品含量，不常用。 （六）影响薄层扫描定量的因素： 1、吸附剂性能及薄层质量：吸附剂颗粒要细，且分布均匀，薄层板薄厚要均匀。 2、点样：TLCS法最主要杂质来源，供试品和对照品溶液点样量接近，遵循随行标准。 3、展开条件：展开距离15cm左右为宜，被分离物质Rf值在0.2～0.8之间，展开过程中，温度变化不应太大。 4、显色：显色要均匀。 5、扫描：扫描条件选择适当，扫描方向一致，通常是沿展开方向。 1、薄层扫描最常用的定量方法是（ ） A、内标法 B、外标法 C、追加法 D、回归曲线定量法 E、曲线校直法 2、影响薄层扫描定量的因素是（ ）（多选） A、吸附剂的性能及薄层板的质量 B、点样操作与随行标准 C、展开条件 D、显色 E、扫描仪输入的参数是否合理 四、气相色谱法（GC)： (一)定义：是以气体为流动相的色谱分析方法。 (二)适用范围：适用于热稳定性好的易挥发性或可转化为易挥发性的组分的分析.主要包括①挥发油及其它挥发性组分：冰片、桉叶素、樟脑、丁香酚、龙脑等。②中药制剂含水量、含醇量的测定。 （三）特点： ①高效能。 ②高选择性：特别适合于复杂试样。 ③高灵敏度：可以检测10?11～10?13g的物质。 ④分析速度快、操作简单：色谱操作及数据处理自动化。 ⑤应用比较广泛：热稳定性好的气体和易挥发或可衍生化为气体的物质均可。 ⑥弱点：受试样蒸气压限制。另外载气种类可选择性小. （四）仪器及分析流程： 现在仪器大多连在电脑上进行自动化控制。 载气→减压→净化→稳压→ →色谱柱→检测器→记录仪 进样 五大系统：载气系统、进样系统、分离系统、检测系统 记录系统 （五）基本原理： 保留时间tR：从进样开始到组分出现浓度极大点时所需时间，即组分通过色谱柱所需要的时间。 死时间t0：组分在流动相中的所消耗的时间(即流动相充满柱内空隙体积占据的空间所需要的时间)，又称流动相保留时间。 调整保留时间tR’：组分的保留时间与死时间之差值， 即组分在固定相中滞留的时间。（tR’= tR－ t0） 半峰宽W1/2：峰高一半处所对应的峰宽。 峰宽W：正态分布色谱曲线两拐点切线与基线相交的截距。 标准差σ：正态分布色谱曲线两拐点距离的一半 σ→对应0.607h处峰宽的一半 1、塔板理论：假定色谱柱每个H高度内有一块塔板，共有若干块塔板，组分在每块塔板两相间分配达平衡，分配系数K小的先出柱。多次分配平衡，K有微小差异组分就可获较好分离。 理论塔板高度H：为使组分在柱内两相间达到一次分配平衡所需要的柱长。 理论塔板数n：组分流过色谱柱时，在两相间进行平衡分配的总次数。 色谱柱柱效用二者衡量，计算公式为： 以调整保留时间tR’代替保留时间tR，则得到反映色谱柱实际柱效的有效理论塔板数neff： 可见，当tR一定时，峰越窄，则H越小， n越大，柱效越高，分离性能越好。 2、速率理论： 因塔板理论有如下缺陷： ①忽略了组分在两相中传质和扩散的动力学过程。 ②只定性给出塔板高度的概念，却无法解释板高的影响因素。 ③排除了一个重要参数——流动相的线速度u，因而无法解释柱效与流速关系更无法提出降低板高的途径。 故而提出速率理论，其吸收了塔板理论的有效成果——H，并从动力学角度较好地解释了影响柱效的因素，提出了Van Deemteer 方程式：