实验11 细胞核的分离和纯化.pptVIP

* * 实验１1 细胞核的分离和纯化 一、目的要求 掌握细胞核的分离、纯化的一般原理 和操作方法。 　二、实验原理 　　柠檬酸能抑制脱氧核糖核酸酶的活性，维持染色质中DNA的正常结构与活性。将肝组织剪碎后，在柠檬酸溶液中制备匀浆，使肝细胞破碎而获得无细胞悬液。如将此种细胞核保存在等渗（0.25mol/L）蔗糖溶液中（内含微量Ca2+，以防止核聚集并减少细胞核的脆性），可以较好地保持其完整的正常结构。 　　在此条件下离心分离得到的仅是细胞核的粗制品，如离心时通过0.88 mol/L或更高浓度（通常用2.2 mol/L）的高渗溶液，适当调整离心力，即可得到纯化的细胞核沉淀。 　三、操作步骤 （一）肝匀浆的制备 新鲜大鼠肝以0.15 mol/L NaCL充分洗净后，用滤纸吸干水分，除去结缔组织并剪碎，称取0.5g肝组织加9份体积的0.08mol/L柠檬酸溶液，制成匀浆。将匀浆液用双层200目尼龙布过滤3次，滤去残渣。 （二）分离细胞质与细胞核 １.　将匀浆液4.5mL倒入离心管中，用4000r/min离心20~30min，将含细胞质的上清液移入一试管中备用。 ２.沉淀中加入0.25mol/L蔗糖-柠檬酸溶液1mL，玻棒搅匀。此为核悬液。 ３.另取离心管1支，加0.88mol/L蔗糖-柠檬酸溶液5mL，用滴管取核悬液，沿管壁缓缓铺于液面上，2000r/min离心10min，弃去