无血清处理对甲状腺癌 tt 细胞内s100a13及fgf1释放机制的初步研究-preliminary study on the release mechanism of s100a13 and fgf1 in tt cells of thyroid cancer treated with serum-free treatment.docxVIP

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2018-08-10 发布于上海
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无血清处理对甲状腺癌 tt 细胞内s100a13及fgf1释放机制的初步研究-preliminary study on the release mechanism of s100a13 and fgf1 in tt cells of thyroid cancer treated with serum-free treatment

2目录 2 一、中文摘要1 二、英文摘要3 三、主要缩略语及英文索引5 四、论文正文6-29 前言 6 实验材料8 实验方法11 实验结果18 实验讨论26 实验结论29 五、参考文献30 六、综述34 七、硕士期间发表的文章44 八、致谢45 PAGE PAGE 10 无血清处理对甲状腺癌 TT 细胞内 S100A13 及 FGF-1 释放机制的初步研究研究生杨井金导师文芳教授曹仁贤教授中文摘要目的：探讨无血清处理对甲状腺癌 TT 细胞内 Ca2+的浓度（[Ca2+]i）变化及 S100A13、FGF-1 蛋白释放的影响，初步阐明 Ca2+在 S100A13、FGF-1 蛋白释放过程中的作用。方法：采用 Western-Blot 检测无血清处理 0h、1h、2h、4h、6h 细胞内 S100A13 及 FGF-1 蛋白表达量，ELISA 检测培养上清 FGF-1 蛋白浓度。应用激光共聚焦显微镜实时动态检测无血清处理 TT 细胞 1h[Ca2+]i 的变化。间接免疫荧光观察 BAPTA-AM（2.5μmol/L）、EGTA（2.5mmol/L）对无血清处理 6h 细胞 S100A13、 FGF-1 蛋白荧光分布的影响，Western-Blot 检测 S100A13、FGF-1 蛋白表达量， ELISA 检测培养上清 FGF-1 蛋白浓度。结果：Western-Blot结果显示无血清处理0h、1h、2h、4h、6h细胞S100A13、 FGF-1蛋白表达量有逐渐下降趋势，0h、1h、2h组间比较无明显差异，4h组细胞 S100A13、FGF-1蛋白表达与0h、1h、2h三组比较差异有统计学意义（P0.05）， 6h组细胞S100A13、FGF-1蛋白表达与0h、1h、2h、4h组差异有统计学意义（P0.01）。上述各时间处理组培养上清ELISA结果显示，0h、1h、2h、4h、6h组细胞培养上清中FGF-1浓度有上升的趋势，4h组与0h、1h、2h三组比较差异有统计学意义（P0.05），6h组培养上清中FGF-1浓度较0h、1h、2h、4h组明显升高（P0.01）。激光共聚焦Ca2+荧光显像结果显示：正常培养的TT细胞[Ca2+]i约0.1～0.3μmol/L，在扫描期间较稳定；无血清处理23min内保持相对稳定，23min后细胞[Ca2+]i迅速上升达到最大值1.6μmol/L，维持17min左右第40min缓慢下降至一个较低水平，第40min至第60min[Ca2+]i接近0.3～0.6μmol/L。1h内细胞平均[Ca2+]i明显高于正常培养组（P0.05）。EGTA、BAPTA-AM能明显抑制无血清处理引起的细胞[Ca2+]i 升高，平均[Ca2+]i与正常培养组差异无统计学意义。湖南省自然科学基金资助项目（No,06jj5046,No.05jj30039）间接免疫荧光结果显示无血清处理 6h 细胞内 S100A13、FGF-1 蛋白荧光强度较正常培养组明显减弱；EGTA、BAPTA-AM 能拮抗无血清处理引起这两种蛋白荧光变弱。Western-Blot 结果显示无血清处理 6h 细胞 S100A13、FGF-1 蛋白表达量较正常培养组明显低，无血清处理同时加入 EGTA、BAPTA-AM 时细胞这两种蛋白表达量与正常培养组无明显差异；上述各组细胞培养上清 ELISA 结果显示无血清处理 6h 组培养上清中 FGF-1 浓度较其它 3 组明显增高（P0.01）。结论：Ca2+可能与无血清处理对甲状腺癌 TT 细胞内 S100A13 及 FGF-1 的释放有关；Ca2+螯合剂 EGTA、BAPTA-AM 能有效拮抗无血清处理引起的 TT 细胞[Ca2+]i 升高，并抑制 S100A13、FGF-1 的释放。关键词：S100A13；FGF-1；[Ca2+]i；Ca2+螯合剂 The mechanism preliminary study for serum-deprivation -induced release of S100A13 and FGF-1 from Thyroid cancer TT cell Abstract Objective: To investigate the effect of serum-deprivation-induced on the changes of [Ca2+]i and the release of S100A13 and FGF1 in thyroid cancer TT cell.Then, to preliminary reveal the role of Ca2+ on the release o