食管鳞癌tp53,her-2,mrp-1突变及蛋白表达与临床病理特征对预后的影响-mutation of tp53, her - 2, mrp - 1 in esophageal squamous cell carcinoma and influence of protein expression and clinicopathological features on prognosis.docxVIP

万方数据 万方数据 摘要 摘要 食管鳞癌 TP53，HER-2 和 MRP-1 突变及蛋 白表达与临床病理特征对预后的影响 摘要 1 研究背景与目的 食管癌是世界上 8 大最常见的恶性肿瘤之一，癌症死亡率为第 6。我国是 食管癌多发地域，食管鳞癌（Esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）是其 主要病理类型，占 95%以上。目前，有关食管癌发生机制研究观点渐趋一致， 认为癌症是基因与环境交互作用的结局，涉及多基因参与、多因素影响、多阶 段的变异积累的演进过程。随着人类对肿瘤遗传学的认识不断深入和第二代、 第三代高通量测序新兴技术发展，基因组学的研究进入了蓬勃发展的阶段。中 国科研工作者独立开展的有关 ESCC 基因 GWAS 研究，获得了丰硕的成果。肿 瘤的浸润深度，分化级别，淋巴结有无转移[10-11]，远处器官有无转移等均可影响 ESCC 患者的生存；化疗患者出现耐药现象也是影响治疗方案选择及治疗功效的 主要影响因素。探讨 ESCC 发生、进展、化疗耐药的相关基因研究对于早期预 防，阻止进展，解除耐药具有重要意义。而癌基因和抑癌基因的激活必须通过 其编码产物或影响其他编码产物的方式才能引起正常细胞的恶性转变，运用免 疫组织化学（Immunohistochemical, IHC）手段分析与这些易感位点或致病基因 控制的蛋白产物对于探讨基因改变对肿瘤的影响具有非常重要意义。 本研究结合 ESCC 组织 P53，HER-2，MRP-1 三种基因外显子测序结果分析 突变基因的突变类型及突变率差异，结合三种蛋白 IHC 结果，探讨 ESCC 患者 三种基因的蛋白表达情况和临床病理特征对预后之间的影响，进一步分析 P53， I HER-2，MRP-1 表达之间是否具有关联，判断三种蛋白独立或联合表达对预后 的价值。以期对 ESCC 发生发展的基因组水平的改变有进一步的认识；获得高 效，敏感的特异性蛋白检测指标，指导相关人群实施有效的预防和干预治疗及 基因治疗。 2 材料与方法： 2.1 研究对象 本研究分为外显子测序组食管癌高发区 ESCC 患者 116 例和癌组织蛋白表达 组 ESCC 患者 728 例，所有患者全部来自河南省郑州大学第一附属医院食管癌 重点开放实验室 50 万食管癌与贲门癌生物样品信息资料库（病例信息时间跨度 为 1973-2015 年）。从资料库选取术后病理为食管鳞癌，病理临床信息核查补充 完善，728 例蛋白表达分析组具有详细 IHC 结果，成功随访的患者进行研究。116 例外显子测序组从治疗医院收集相应患者癌组织及癌旁正常组织蜡块，并置于 -20 度冰箱保存。 2.2 实验方法 对外显子测序分析组 116 例 ESCC 进行石蜡组织 DNA 提取，获得 DNA 后 进行电泳及 DNA 浓度测量及标化，使符合外显子测序标准。进行测序。 2.3 统计学方法 使用 SPSS 21.0 对数据进行统计学分析。运用 x2 检验进行组间差异比较， Spearman 秩相关分析变量之间的相关性；Kaplan-Meier 法绘制生存曲线，进行 生存率的估计，log-rank 法检验生存差异；Cox 比例风险回归模型筛选食管鳞癌 患者预后的影响因素。检验水准：α=0.05。 3 结果 3.1 ESCC 癌组织全基因外显子测序结果 3.1.1 整体突变情况 II 检测 116 例 ESCC 外显子范围内的突变进行分析，共发现 166945 个突变事 件，其中 SNP 突变为主，占 94.96%，Insertion 和 Deletion 仅占 2.29%与 2.74%。 3Flank，5Flank，RNA 突变率较高，分别为 15.32%，15.36%，42.81%。 3.1.2 TP53 基因突变结果 TP53 外显子发生突变例数为 80 例，发生突变的频率是 68.6%。共发生 100 个突变事件，包括 83 个 SNP、9 个 Insertion 和 8 个 Deletion。错义突变发生率 最高为 58%，无义突变发生率次之为 20%，然后是移码插入发生率为 9%。TP53 基因外显子发生 SNP 突变率明显低于全外显子组的 SNP 突变发生率，发生 Deletion 和 Insertion 的突变率明显高于全外显子组的 SNP 突变发生率。 3.1.3 HER2 与 MRP-1 基因突变结果 HER2 基因发生突变频率为 1.72%（2/116），共两个突变事件；MRP-1 基因 发生突变频率为 3.45%（4/116），共 10 个突变事件。 3.2 IHC 蛋白表达分子组结果 3.2.1 ESCC 组织中 P53，HER-2，MRP-1 三