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PAGE PAGE 9 第2讲__微生物的培养与应用 [考纲导学]　1.微生物的分离和培养　2.培养基对微生物的选择作用 知识梳理| 夯实高考双基 回扣教材 一、微生物的实验室培养 1．培养基 (1)定义：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 (2)成分：一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，还要满足不同微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。 (3)分类：按照物理性质可以分为液体培养基和固体培养基。 2．无菌技术 (1)含义：培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。 (2)关键：防止外来杂菌的污染。 3．无菌技术的方法、类型和对象(连线) 【答案】　(①②⑥)—b—(Ⅰ Ⅱ)　(③④⑤)—a—(Ⅲ Ⅳ) 4．大肠杆菌的纯化培养 (1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基过程：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。 (2)纯化大肠杆菌： ①上图A可表示用平板划线法接种获得的平板，菌体的分离是通过连续划线操作实现的。 ②上图B可表示用稀释涂布平板法接种获得的平板，菌体的分散是通过一系列的梯度稀释操作实现的。 ③菌种的保存方法： a．对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。 b．对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。 二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1．筛选菌株 (1)寻找目的菌株的原则：根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 (2)实验室筛选尿素分解菌的方法：使用以尿素为唯一氮源的选择培养基进行培养。 (3)选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 2．微生物的计数 常用的方法有显微计数法和稀释涂布平板法。 3．实验流程 (1)土壤取样：富含有机质的土壤表层土。 (2)样品的稀释：通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30～300、适于计数的平板。 (3)微生物的培养与观察：根据菌落的特征区分微生物。 (4)细菌的计数：统计菌落的数目，根据公式“每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M[C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数]”进行计算。 4．分解尿素的细菌的鉴定 (1)方法：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养分解尿素的细菌。 (2)原理： 　　　　 分解尿素的细菌 　　　　　　 ↓ CO(NH2)2＋H2Oeq \o(――→,\s\up10(脲酶))CO2＋2NH3 　　　　　　　　　　　 ↓ 　　　　　　酚红指示剂→变红色 三、分解纤维素的微生物的分离 1．纤维素酶 (1)组成：纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。 (2)作用 纤维素eq \o(――→,\s\up10(C1酶),\s\do15(CX酶))纤维二糖eq \o(――→,\s\up10(葡萄糖苷酶))葡萄糖 2．纤维素分解菌的筛选 (1)原理 ①筛选方法：刚果红染色法。 　　　　　　　纤维素分解菌 　　　　　　　　　↓ eq \b\lc\ \rc\}(\a\vs4\al\co1(刚果红,纤维素))→红色复合物eq \o(――――→,\s\up10(纤维素酶),\s\do1 ())红色消失，出现透明圈 ②培养基：以纤维素为唯一碳源的选择培养基。 (2)实验流程 土壤取样：富含纤维素的环境 ↓ 选择培养：用选择培养基培养，以增加纤维素分解菌的浓度 ↓ 梯度稀释：制备系列稀释液 ↓ 涂布平板：将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 ↓ 挑选产生透明圈的菌落 网络记忆 重点突破| 领悟高考方向 重点1　微生物的分离与培养 [考点精讲] 1．消毒与灭菌技术的比较 条件 结果 常用方法 应用范围 消毒 较为温和的物理或化学方法 仅杀死物体表面或内部的部分对人体有害的微生物 煮沸消毒法 日常用品 巴氏消毒法 不耐高温 的液体 化学药剂 消毒法 用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源 灭菌 强烈的理化因素 杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 灼烧灭菌法 接种工具 干热灭菌法 玻璃器皿、 金属工具 高压蒸汽 灭菌法 培养基及容 器的灭菌 2.两种微生物纯化培养技术的比较 方法 平板划线法 稀释涂布平板法 注意 事项 (1)接种环的灼烧 ①第一次划线前：杀死接种环上的微生物，避免污染培养物 ②之后每次划线前：杀死残留菌种，保证每次划线菌种来自上次划线末端 ③划线结束后：杀死残留菌种，避免污染环境和感染操作者 (2)灼烧接种环之后，要冷却后再进行取种，以免温度太高杀死菌种 (3)划线时最后一区域不要与第一区域相连 (4)划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破 (1)稀释操作时：每支试管及其中的9 mL水、移液管等均需灭菌；操作