蔗糖酶的离提纯及酶促.pptVIP

ghy302@163.com 蔗糖酶的分离提纯及酶促反应动力学实验 （综合性大实验） 课件制作、讲授及实验指导：郭慧云 内容提示 本实验含如下内容（1、2、3是酶分离提纯及比活力测定部分的内容；4、5是酶促反应动力学部分的内容）： 1、 3，5-二硝基水杨酸比色定糖法（DNS法）工作曲线的制 作及三种蔗糖酶样品（E1、E2 、E3）的测定（酶活力）； 2、 Folin-酚法测定蛋白质含量工作曲线的制作及三种蔗 糖酶样品（E1、E2 、E3）的测定（蛋白质含量）； 3、蔗糖酶的分离提纯（细胞破壁、抽提、有机溶剂分级、 透析和离子交换柱层析—装柱、上样、洗柱、洗脱、收 集酶活力峰、保存）； 4、蔗糖酶米氏常数的测定（用双倒数法）； 5、用正交法测定几种因素对蔗糖酶活力的影响（含实验设 计及数据处理的相关知识）。 一、目的要求 1.熟悉工作曲线的制作方法及使用注意事项； 2.学习掌握3，5-二硝基水杨酸比色定糖的原理和方法； 3.学习掌握Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法； 4.学习酶蛋白分离提纯的原理； 5.学习掌握细胞破壁、抽提、有机溶剂分级、透析和离子交换柱 层析技术；