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第十章 DNA的生物合成 （复制 replication） 半保留复制（semiconservative replication) 第二节 DNA复制的酶学 和拓朴学变化 三种DNA聚合酶均具有 5′→3′聚合酶活性 3′→5′外切酶活性 在体外，α、ε和θ亚基组成核心酶，具有聚合酶和3’→ 5’外切核酸酶活性。 ε 亚基执行碱基选择功能 二聚体中，两个?-亚基形成环状结构包绕DNA双螺旋中的一股，并与核心酶紧密相连，带动核心酶沿DNA模板链滑动，使核心酶催化位点位于复制叉附近。 τ亚基使核心酶形成二聚体。 其余5种亚基（γ、δ、δ’、ψ、χ）形成r复合物。r复合物只与一个单体结合，β亚基在DNA上定位和解离都需要r复合物。另一个单体由于不存在r复合物，因此可以进行连续复制。 真核生物DNA聚合酶 真核生物中现已发现五种DNA聚合酶，分别命名为DNA聚合酶α、β、γ、δ和ε。由于DNA聚合酶α是上述五种酶中唯一具有引物酶活性，并且进行连续复制的能力较弱，因此认为该酶的作用主要是合成随从链；而DNA聚合酶δ连续复制的能力比DNA聚合酶α强得多，故认为它与领头链的合成有关。 四.复制中的解链 和DNA分子拓朴学变化 DNA解螺旋酶 大肠杆菌中已发现4种 DNA解螺旋酶， Dna A 辨认复制起始点 Dna B 解开DNA双链 DnaC 运送和协同DnaB 2. DNA拓扑异构酶 当DNA在复制叉部位解链时，其张力会传到双螺旋的其他部位，使双螺旋压缩，超螺旋的数目增加而引起DNA分子打结、缠绕、连环。 DNA拓扑异构酶是催化DNA拓扑异构体相互转换的酶，在复制中可释放解链产生的张力，也可在转录和重组中行使类似功能。 DNA拓扑异构酶的主要作用是通过水解DNA分子中的某一个部位的磷酸二酯键使超螺旋释放，然后再催化形成磷酸二酯键。 I型拓扑异构酶只能水解一条链上的某一个磷酸二酯键；II型拓扑异构酶可以同时水解两条链同一部位的磷酸二酯键 3 .单链DNA结合蛋白(single stranded DNA binding protein,SSB) 单链DNA结合蛋白与已形成的DNA单链结合使之不能重新形成双链. 四 引物酶(DnaG) 引物酶： 复制是在一段RNA引物上 (primase) 加入脱氧核苷酸，而催化 引物合成的RNA聚合酶便是 引物酶。 5? 3? A T G C T C A A A G T G A 3? 5? 3? 5? OH T C T O H P P P 5? G P-PP HO dTTP dATP dCTP 复制过程的脱氧核苷酸聚合 带斜线的小方框代表引物 DNA聚合酶 以DNA为模板，催化DNA合成的酶； 大肠杆菌中DNA聚合酶I、II、III DNA聚合酶 I （5′→3′外切酶活性） （3′→5′外切酶及DNA聚合酶活性） Klenow片段 G 5? 3? DNApol I A 外切活性 dCTP 聚合活性 G 5? 3? C DNA-pol I无活性 DNApol I的校读功能 上：DNApol I的外切酶活性切除错配碱基， 并用其聚合酶活性参入正确配对的底物 下： 碱基配对正确，DNA-pol I并不表现活性 在复制延长中真正催化核苷酸聚合的酶 10种亚基组成的不对称二聚体 α ε θ组成核心酶 β 亚基能辨认引物 两边的β 亚基能夹住模板链，并且能使 酶沿着模板链滑动 DNA 聚合酶 III ? ? E.coli DNA 聚合酶Ⅲ不对称二聚体 ? ? ? ? ? ε ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ε 真核生物的DNA聚合酶 5种 DNA-pol αβγδε DNA-pol α、δ复制延长中催化作用 α－随从链 δ－领头链 DNA-pol ε与DNA-pol I相似， 校对、修复、填补 DNA-pol γ 线粒体内 DNA-pol β在无其它DNA-pol时起作用 （注意比较真核与原核区别） 重点 DNA聚合酶 原核( DNA-pol I II III） DNA-polI 校正复制中错误，填补复制修复空隙 可水解为两个片段： 小片段：5’ 3’ 核酸外切酶活性