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XAGE―1b基因在肝癌细胞中表达研究 　　摘要：目的 研究肝癌细胞中XAGE-1b基因的表达。方法 以64例肝癌患者的肝癌组织及癌旁组织为研究对象，通过Real-timePCR法进行检测和分析。结果 XAGE-1b基因在肝癌组织与在癌旁组织中表达值比较，差异有统计学意义（P0.05）。结论 XAGE-1b可作为肝癌诊断的标记物，建议与AFP检测联合应用。 　　关键词：肝癌；XAGE-1b；PCR；表达 　　Abstract：Objective To study the expression of XAGE-1b in hepatoma cancer.Methods Take the cancerous tissue and para-cancer tissue in 64 cases of PHC as the research objects，employ the method of real time quantified PCR to study the expression of XAGE-b in PHC.Results The expression of PHC was higher than in para-cancer tissue （P0.05）.Conclusion XAGE-1b may serve a valuable target in monitoring of PHC，suggest that XAGE-1b work together with AFP will be better. 　　Key words：Hepatoma cancer； XAGE-1b；Expression 　　原发性肝癌（PHC）病情危重，发病率较高，目前关于该病的病因和发病机制尚未明确，普遍认为与肝硬化、病毒性肝炎和黄曲霉素等致癌物质、环境因素有关，患者表现有肝区疼痛，消瘦乏力，食欲不振等症状，而近年来针对原发性肝癌研发了多种治疗的新技术和新方法，但仍有60%左右的患者会出现复发和转移，以往肝癌检查都是采用肝癌学前标记物如AFP检测，或者影像学检查，存在一定的不足之处，本实验旨在通过RT-PCR法分析XAGE-1b在肝癌细胞中的表达情况，来确定XAGE-1b能否作为PHC诊断及预后的依据。 　　1资料与方法 　　1.1仪器与试剂 荧光实时定量PCR反应仪：Ftc-2000（上海枫岭生物技术公司）；微量移液器（Gilson公司）；离心机（Eppendorf5415D）；凝胶成像分析仪（上海复日公司）；石蜡切片机（RM2145，LEICA公司）；试剂盒（上海近岸科技有限公司），逆转录试剂盒（广州泛思生物技术科技有限公司）；普通PCR反应试剂（包括Tap酶、dNTP，Buffer等）（上海申能博采公司）。TaqMan-MGB荧光探针及其相应的PCR反应引物（上海基康生物技术公司）。 　　1.2标本来源 2010年10月～2014年10月江苏大学附属医院收治的病理证实为原发性肝癌患者共64例，其中男38例，女26例，年龄34～72岁，分别取手术切除30 min内的癌组织和癌旁组织（距肝癌组织1 cm）为样本，置于预装RNAlater保存液的冻存管中，封口编号备用。 　　1.3实验步骤 按传统一步法提取组织样本中的总RNA，以12%琼脂糖凝胶电泳抽样检验其质量。提取出RNA后使用反转录试剂盒制备cDNA，以cDNA为模板进行PCR反应，以GAPDH为内参基因。总反应体系20 μL，其中探针（20 mmol/L）0.5 μL，引物（20 mmol/L）0.9 μL，Mix10 μL（PCR试剂盒，日本TOYOBO公司），标本组织cDNA2 μL，H20补至20 μL，每个样品的目的基因与内参基因各设3个重复实验。XAGE-1b与GAPDH分别在相应的反应条件下进行PCR检测。每次反应均设置空白对照组及用于绘制标准曲线的6个梯度的标准样品反应混合物，标准样品反应混合物由复旦大学病毒与分子免疫学实验室制备提供。PCR反应结束后，计算机自动获取标本中XAGE-1b和GAPDH的Ct值，对照标准曲线计算每个样本XAGE-1b和GAPDH基因的拷贝数。结果以XAGE-1b和GAPDH基因拷贝数的比值表示相对表达量。 　　1.4统计学方法 应用SPSS 18.0统计学软件，采用χ2检验或秩和检验，以P0.05为差异有统计学意义。 　　2结果 　　抽提RNA检验结果见图1，在16s sRNA和28s sRNA条带明亮、清晰，证明所得样品质量优良。自64例肝癌组织和癌旁组织抽提的RNA经PCR检测，结果显示肝癌组织表达量为2015×105，高于癌旁组织的表达量147×105，两组比较存在显著性差异（P0.05），见表1。