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实验五 人类淋巴细胞株培养 一、细胞培养准备工作（清洗、消毒、灭菌） 二、培养基的配制 三、细胞传代培养 四、死活细胞的鉴别 五、细胞生长曲线的测定 一、实验目的 能独立地进行用于细胞培养的个中器皿的清洗与消毒，掌握干热灭菌法、湿热灭菌法和滤过除菌法的操作，了解化学消毒法的使用方法。 二、实验原理 清洗与消毒是组织培养实验的第一步，是组织培养中工作量最大，也是最基本的步骤。 体外培养细胞所使用的各种玻璃或塑料器皿对清洁和无菌操作的要求程度很高。细胞培养不好与清洗不彻底有很大关系。 灭菌手段的选择也十分重要，对不同的物品需采用不同的灭菌方法。假如选用的方法不对，即使达到了无菌却使被灭菌药品丧失了营养价值、生物学特性或其他使用价值也不行。 四、仪器、材料和试剂 （一）仪器 超净工作台、干燥箱、高压锅、过滤器 （二）材料 微孔滤膜（直径25mm）：孔径为0.22um (三）试剂 75%酒精、重铬酸钾、浓硫酸、NaOH、 HCl等 五、实验步骤 （一）清洗 1.新玻璃器皿的清洗 先用自来水刷洗，再浸泡5%稀盐酸中和玻璃表面的碱性物质和有害物质。 2.使用过的玻璃器皿的清洗 （1）立即进入清水，避免干涸难洗； （2）用洗涤剂清洗玻璃器皿，自来水清洗数遍，倒置自然干燥； （3）浸酸性洗液过夜； （4）从洗液捞出自来水冲洗10~15次去除酸性洗液，蒸馏水刷洗10次，倒置烘干；