农作物种子生活力的测定.DOC

农作物种子生活力的测定 1种子生活力的概念 种子生活力(seed?viability)指种子发芽的潜在能力或种胚具有的生命力。 一些休眠种子在发芽试验中不能发芽，但它是有生活力的，破除休眠后，能长成正常幼苗。而生活力反映的是种子发芽率和休眠种子百分率的总和。所以，种子生活力测定，反映的是种子批的最大发芽潜力。在短期内急需了解种子发芽率或当某些样品在发芽末期尚有较多的休眠种子时，可应用生活力的生化法快速估测种子生活力。 ????生活力测定是应用2，3，5-三苯基氯化四氮唑（简称四唑，TTC）无色溶液作为一种指示剂，这种指示剂被种子活组织吸收后，接受活细胞脱氢酶中的氢，被还原成一种红色的、稳定的、不会扩散的和不溶于水的三苯基甲替。据此，可依据胚和胚乳组织的染色反应来区别有生活力和无生活力的种子。 ??? ?除完全染色的有生活力种子和完全不染色的无生活力种子外，部分染色种子有无生活力，主要是根据胚和胚乳坏死组织的部位和面积大小来决定，染色颜色深浅可判组织是健全的，还是衷弱的或死亡的。 ?? 2试剂 ??应用四唑的0.1%～1.0%(m/Ｖ)溶液，1.0%溶液用于不切开胚的种子染色，而0.1%～0.5%溶液可用于已经切开胚的种子染色。配成的溶液须贮存在黑暗处或棕色瓶里。 ??如果用蒸馏水配制溶液的pH值不在6.5～7.5范围内，则采用磷酸缓冲液来配制。 ??磷酸缓冲液的配制方法如下： ??溶液Ⅰ：称取9.078g磷酸二氢钾（KH2PO4）溶解于1000mL蒸馏水中。 溶液Ⅱ：称取9.472g磷酸氢二钠（Na2HPO4）或11.876g磷酸氢二钠（Na2HPO4·2H2O）溶解于1000mL的蒸馏水中。 取溶液Ⅰ2份和溶液Ⅱ3份混合即成缓冲液。 在该缓冲液中溶解准确数量的四唑盐类，以获得准确的浓度。如每100mL缓冲液中溶入1g 四唑盐类即得1%浓度的溶液。 3仪器、设备 3.1控温设备：电热恒温箱或发芽箱；冰箱。 3.2观察器具：体视显微镜或手持放大镜；光线充足柔和的灯光。 3.3容器：棕色定量加液器；不同规格的染色盘。 3.4切刺工具：单面刀片、矛状解剖针、小针等。 3.5预湿物品：滤纸、吸水纸和毛巾等。 3.6天平：天平感量为0.001g。 4.7其他：镊子、吸管等。 4测定程序 4.1试验样品的数取 ??每次至少测定200粒种子，从经净度分析后并充分混合的净种子中，随机数取每重复100粒或少于100粒的若干副重复。如是测定发芽未期休眠种子的生活力，则单用试验未期的休眠种子。 4.2种子的预措预湿 ??预措是指有些种子在预湿前须先除去种子的外部附物（包括剥去果壳）和在种子非要害部位弄破种皮，如水稻种子脱去内外稃，刺破硬实等。 ??为加快充分吸湿、软化种皮，便于样品准备，以提高染色的均匀度，通常种子在染色前要进行预湿。根据种的不同，预湿的方法有所不同。一种是缓慢润湿，即将种子放在纸上或纸间吸湿，它适用于直接浸在水中容易破裂的种子（如豆科大粒种子），以及许多陈种子和过分干燥种子；另一种是水中浸渍，即将种子完全浸在水中，让其达到充分吸胀，它适用于直接浸入水中而不会造成组织裂损伤的种子。不同种子种子的具体预湿度和时间可参见《农作物种子四唑染色技术规定》。 4.3染色前的准备 ??为了使胚的主要构造和活的营养组织暴露出来，便于四唑溶液快速而充分地渗入和观察鉴定，经软化的种子应进行样品准备。准备方法因种子构造和胚的位置不同而异（详见《农作物种子四唑染色技术规定》），如禾谷类种子沿胚纵切，伞形科种子近胚纵切，葱属沿种子扁平面纵切等。西瓜等种子预湿后表面有粘液，可采用种子表面干燥或把种子夹在布或纸间揩擦清除掉。 4.4染色 ?将已准备好的种子样品放入染色盘中，加入适宜浓度的四唑溶液（见《农作物种子四唑染色技术规定》）以完全淹没种子，移置一定温度的黑暗控温设备内或弱光下进行染色反应。所用染色时间因四唑溶液浓度、温度、种子种类、样品准备方法等因素的不同而有差异。一般来说，四唑溶液浓度高，染色快；温度高，染色时间短，但最高不超过45℃。到达规定时间或染色已很明显时，倒去四唑溶液，用清水冲洗。 4.5鉴定前处理 ??为便于观察鉴定和计数，将已染色的种子样品，加以适当处理使胚主要构造和活的营养组织明显暴露出来，如一些豆类沿胚中轴纵切，瓜类剥去种皮和内膜等。不同种类种子的处理方法详见《农作物种子四唑染色技术规定》。 4.6观察鉴定 ??大中粒种子可直接用肉眼或手持放大镜进行观察鉴定，对小粒种子最好用10～100倍体视显微镜进行观察。 ??观察鉴定时，确定种子是否具有生活力，必须根据胚的主要构造和有关活营养组织的染色情况进行正确的判断。一般的鉴定原则是：凡胚的主要构造或有关活营养组织（如葱属、伞形科和茄科等种子的胚乳）全部染成有光