乳腺癌NKG2D表达及对NK细胞杀伤活性影响.docVIP

乳腺癌NKG2D表达及对NK细胞杀伤活性的影响 　　【摘要】 目的 分析乳腺癌NKG2D表达及对NK细胞细胞毒的影响。方法 应用免疫荧光技术和流式细胞术(FCM)分选25例乳腺癌、25例健康对照的外周血NK细胞,定量分析NKG2D 蛋白表达。用MTT比色法检测抗NKG2DpAb加入前后NK细胞的细胞毒效应。结果 乳腺癌患者NK细胞的NKG2D蛋白表达量均低于正常对照,差异有显著性(P0.05) 。抗NKG2DpAb能显著抑制NK细胞对K562细胞的细胞毒效应。结论 NK细胞NKG2D表达异常与乳腺癌的发生发展可能有关。 　　 【关键词】 乳腺癌;杀伤细胞,天然;NKG2D 　　 　　Expression of NKG2D and Its Effect on Cytotoxicity of NK Cells in Human Breast Cancer 　　 　　ZHOU Feng-ling, LIN Na.Department of biochemical laboratory,Jining medical college,Jining 272013,China 　　 　　【Abstract】 Objective To analyze the expression of NKG2D and its effect on cytotoxicity of natural killer (NK) cells in patients with breast cancer.Methods NK cells in the peripheral blood of 25 patients with breast cancer and 25 healthy subjects were sorted by immunofluorescence technique and flow cytometry(FCM).Expression of NKG2D protein was quantitatively analyzed.The cytotoxicity of NK cells before and after addition of NKG2DpAb was detected by monotetrazolium(MTT) colorimetry. Results The levels of NKG2D expression in NK cells of patients with breast cancer were significantly lower than those in normal controls (P0.05).The NKG2DpAb could obviously inhibit the cytotoxicity of NK cells towards K562 cells.Conclusion Abnormal expression of NKG2D protein in NK cells may be correlated with the occurrence and progression of breast cancer. 　　【Key words】 Breast cancer; Natural killer cell; NKG2D 　　 　　 　　NKG2D是NK细胞表面主要的活化性受体,近年来研究表明NKG2D在NK细胞的感染免疫和肿瘤免疫发挥重要的作用,成为肿瘤免疫机制研究热点。国内外很多研究发现,NKG2D受体的下调可导致多种肿瘤的发生[1,2]。作者应用流式细胞术(FCM)比较和分析乳腺癌外周血NK细胞NKG2D的表达情况,并以白血病细胞K562分析抗NKG2 DpAb对NK细胞的细胞毒作用的影响,以期探讨NKG2D表达异常与乳腺癌的相关性,为乳腺癌防治提供新思路。 　　1 资料与方法 　　1.1 临床资料 选取活检病理诊断明确的原发性乳腺癌25例,均未经手术及放、化疗治疗,平均年龄42.3岁,对照组为健康献血员25例,平均年龄41.1岁。 　　1.2 主要试剂和设备 　　鼠抗NKG2D多抗购自美国eBioscience。鼠抗人CD3/PE-Cy5,鼠抗人CD??56/FITC及PE标记的鼠IgG1同型对照均为晶美生物技术有限公司公司提供。流式细胞仪为美国Becton Dickson公司产品。人白血病细胞株K562 (美国ATCC)由济宁医学院生化实验室冻存。 　　1.3 FCM检测NKG2D的表达 试验管中加入鼠抗人CD?3/PE-Cy5 5 μl, 鼠抗人CD??56/FITC 10 μl,鼠抗人NKG2D/PE 20 μl;对照管中加入鼠抗人CD?3/PE-Cy