§7.4免疫组织化学和免疫印迹技术.pptVIP

* * §7. 4 免疫组织化学与免疫印迹技术 利用抗原-抗体间的特异反应，通过标记抗体，可现场观察组织切片或细胞样品中抗原的种类与位置，称为免疫定位分析。这种方法将免疫反应的特异性和灵敏度与显微镜的精密度结合起来，能比较快速地测出少量抗原或抗体在细胞内或组织内的定位及分布，因此可用于免疫细胞化学和免疫组织化学的检测。对某些生物功能分子在细胞或组织中的表达和定位是非常有效的方法之一，在临床医学、病毒学、免疫学以及生物学基础理论的研究中日益得到广泛的应用。 常用的标记方法有荧光染料、酶和胶体金或银纳米粒子。相应的检测方法分别为免疫荧光分析（或称为荧光抗体技术）、免疫酶染法和胶体金技术。前者用荧光显微镜，后两者用电子显微镜进行观察与测量。检测时，样品在与标记抗体反应后常需彻底冲洗以免非特异性反应干扰观测。 §7. 4. 1 免疫荧光分析 将荧光素（异硫氰荧光素或异硫氰四甲基罗丹明，600 nm，深红色）等荧光色素用双功能交联剂标记在抗体的Fc段，这一过程不影响抗体与细胞或组织中抗原的特异性结合，标记的抗体可直接与组织切片或细胞中的抗原结合，经反应和洗涤后在荧光显微镜下进行观测。 标本中如有相应抗原存在，即与荧光抗体特异结合，在镜下可见有荧光的抗原抗体复合物，这一方法称为直接法。此法的优点是简单、特异。但其缺点是