噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌技术的引进与运用.PPTVIP

全自动核酸提取仪提取DNA 2、PCR扩增 在25ul反应体系中，上、下引物各1ul,2×Taq PCR MasterMix 13ul，DNA模板4ul，纯水6ul。PCR反应条件：预变性94℃5min ，变性94℃ 1min ， 退火60℃1mi n，延伸72℃1 min ，循环次数30次，最后充分延伸72℃10 min， 每次扩增分别设阳性及阴性对照 。 3、电泳产物分析 扩增产物 ，经2％琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下观察结果获得核酸指纹图谱 。 标准分枝杆菌核酸指纹图谱 自贡市分枝杆菌指纹图谱 自贡市分枝杆菌菌种鉴定结果 2012至2016年共完成3650株菌株DNA提取及鉴定工作，以核酸为模板扩增7个位点（16S rRNA，Rv0577，IS1561’，Rv1510，Rv1970，Rv3877/8和Rv3120）的目的片段，根据核酸指纹图谱初步鉴定结核分枝杆菌1634株、非洲Ⅰ型20株、非结核分枝杆菌38株。 该技术的引进与应用对了解我市结核分枝杆菌流行株的种型特征，进行分子流行病学调查和研究，临床诊断和治疗提供了病原学依据，并取得可喜的成果。 使患者个体及时得到诊治提供了保障，为控制结核病的传播具有实际意义，同时推动了中心结核病实验室检测能力的建设； 核酸指纹图谱鉴定意义 核酸指纹图谱技术对分枝杆菌菌种鉴定在四川省的首次应用后，已为省内推广使用该技术提供了示范参考作用。该技术不仅快速可靠，而且具有成本低廉，可建立标准化操作程序的优点，不仅对临床诊断和治疗，而且在流行病学上均有重要意义。 国内首次发现脓毒分枝杆菌及四川首次发现马赛分枝杆菌感染，为进一步开展非结核分枝杆菌病的研究提供了先进技术依据。 谢谢！ 这张表显示了WHO全球结核病报告中结核病高负担国家中的排名前三位的国家，分别是印度、印尼和中国 中国的发病人数和患病人数占全球的将近10%。 * 核酸指纹图谱分析应用于分枝杆菌菌种鉴定 自贡市疾病预防控制中心 邓建平 2017.04 前言 分枝杆菌属包括结核分枝杆菌复合群(MTC,包括结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌、田鼠分枝杆菌、卡介苗)、麻风分枝杆菌及非结核分枝杆菌(nontuberculosis mycobacteria，NTM)。自1882年Koch发现结核菌以来，已报道了100余种分枝杆菌，其中约30种与人类或动物疾病有关。其中结核分枝杆菌(MTB)是最常见且是最重要的致病菌。不同分枝杆菌感染的症状、体征及影像学检查并无特异性，而各自的治疗方案却差异较大。为对结核病病原做出准确判定，以及在亚种水平上对我市分枝杆菌临床分离株复合群进行菌种鉴定，是结核病防治工作中，病原学诊断的一项重要指标。 一、结核病的流行疫情 结核病是伴随人类历史最长，由单一致病菌造成人类死亡最多的慢性传染病，历史上称其为“白色瘟疫”，我国旧称“痨病”，民间素有“十痨九死”的之说。在20世纪40年代链霉素等抗结核药物发明之前，结核病几乎是不治之症。 根据WHO统计,全球结核病感染人数约20亿,每年新发病例800万,每年死于结核的人数约130万。我国是世界上22个结核病高负担国家之一，患者人数仅次于印度、印尼，居全球第三位。 * WHO发布2016年全球结核病报告 2016年10月14日 发布，数据涵盖了202个国家和地区的99%的人口和结核病病例。 2015年，世界范围内估计有1040万新发病例，其中男性590万（56%），女性350万（34%），儿童100万（34%）。新发病例中有120万（11%）HIV患者。 印度、印度尼西亚、中国、尼日利亚、巴基斯坦和南非这六个国家占了新发病例总数的60%。 2015年全球估计有48万新发的MDR-TB病例和10万耐利福平结核病（RR-TB）病例。印度、中国和俄罗斯三个国家占所有这58万病例的45%。 2015年有140万人死于结核病，另外40万是TB/HIV双重感染人群死亡。虽然在2000到2015年间，结核病死亡以22%的速度在下降，但2015年结核病仍然排在全部死亡原因中的前十名。 WHO发布2016年全球结核病报告 全球在2000到2015年避免了4900万结核病死亡。 2015年全球报告肺结核病例610万，仍有约430万的估算病例未被发现和报告。 在2015年估计的58万MDR-TB患者中，只有12.5万（20%）得到了治疗。2013年MDR-TB病例队列的治疗成功率为52%。 2015年，55%的报告肺结核病例进行了HIV检测，TB/HIV