底物辅酶抑制剂和激动剂等
酶法分析 是利用酶作为工具对特定物质(底物、辅酶、抑制剂和激动剂等)进行定量分析的方法。 酶法分析与酶活力测定的异同 相同点:二者均使用了酶促反应 不同点: 测定的目的物不同,实验设计不同 酶活力测定中待测物为酶,因而酶必须 是限速因素,而底物和辅酶等必须过量; 酶法分析中待测物不是酶,而是底物或辅酶或抑制剂或激动剂等等。因而必须使待测物成为该反应的限速因素。 因此二者是不相同的,不能混为一谈。 终点法(总变量法 ) 终点法是以下述原理为基础的: 先借助酶反应(单个酶反应或者几种酶构成的偶联酶反应)使被测物质定量地进行转变,然后在转变完成后,测定底物、产物或辅酶物质(第二底物)等的变化量,因此称为终点测定法。终点法是酶法分析中最普遍,最广泛的定量法。 终点法的条件 必须有专一地作用该被测物质的酶,并能得到它的制品。 能够确定使这种酶反应接近进行完全的条件。 反应中底物的减少或产物的增加或辅酶物质的改变等可以借助某种简单的方法进行测定。 在能满足这些条件的情况下,最好是采用单一酶反应就能进行定量检测。 使用终点法应注意的问题 1.酶的底物专一性: 绝对专一性 相对专一性 立体异构专一性 对于酶法分析来说,最理想的酶是具有绝对专一性的酶。 2.反应的平衡 对于终点法来说,要求反应接近进行完全,
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