人教版高中生物选修三1.1《DNA重组技术的基本工具》精讲课件.pptVIP

(3)DNA连接酶催化两个DNA片段形成磷酸二酯键;而通过DNA连接酶作用能将两个DNA分子片段连接,表明经两种限制酶(BamHⅠ和BglⅡ)切割得到的DNA片段,其黏性末端相同。 (4)由题意知:由于与图三空圈相对应的大肠杆菌能在含氨苄青霉素的培养基上生长,而不能在含四环素的培养基上生长,故可推知与图三空圈相对应的图二中的菌落能抗氨苄青霉素,但不能抗四环素。由图二、图三结果显示,多数大肠杆菌都能抗氨苄青霉素,而经限制酶BamHⅠ作用后,标记基因tetR被破坏,而不能抗四环素,故多数大肠杆菌导入的是pBR322质粒。 答案:(1)筛选(鉴别)目的基因是否导入受体细胞 (2) (3)磷酸二酯　两种限制酶(BamHⅠ和BglⅡ)切割得到的黏性末端相同 (4)能抗氨苄青霉素,但不能抗四环素　pBR322质粒 【互动探究】 (1)图一中有多个限制酶作用位点,其作用是什么? 提示:供外源DNA(或目的基因)插入其中。 (2)本题中将经BamHⅠ处理后的质粒与用EcoRⅠ处理得到的目的基因,通过DNA连接酶是否一定能连接,为什么? 提示:不一定。BamHⅠ和EcoRⅠ处理得到的DNA黏性末端如果相同则可以连接,否则不能连接。 专题1　基因工程 1.1　DNA重组技术的基本工具 一、基因工程的概念辨析 创造出人类需要的新的_________和 _________ 结　果 剪切→_____→_____→表达 基本过程 ____________ 操作水平 _____ 操作对象 生物体外 操作环境 ____________ 基因工程的别名 DNA重组技术 基因 DNA分子水平 拼接 导入 生物类型 生物产品 二、DNA重组技术的基本工具 1.限制性核酸内切酶(也称“限制酶”): (1)来源:主要来自于_________。 (2)种类:约______种。 (3)特点:具有专一性。 ①识别双链DNA分子的某种_______________。 ②切割特定核苷酸序列中的特定位点。 (4)作用:断开每一条链中_________的两个核苷酸之间的 ___________。 (5)结果:产生_________或_______。 原核生物 4 000 特定核苷酸序列 特定部位 磷酸二酯键 黏性末端 平末端 2.DNA连接酶: (1)作用:将____________“缝合”起来,恢复被_______切开的 两个核苷酸之间的___________。 (2)种类: 既可以“缝合”双链DNA片段互补的 _________,又可以“缝合”双链DNA 片段的_______ T4噬菌体 T4DNA 连接酶 只能“缝合”具有_____________的 双链DNA片段 _____ _____ ________ DNA连接酶 特　点 来　源 种　类 双链DNA片段 限制酶 磷酸二酯键 E·coli 大肠 杆菌 互补黏性末端 黏性末端 平末端 3.基因进入受体细胞的载体: DNA分子 λ噬菌体 一个至多个限制酶切割位点 标记基因 携带外源DNA片段进入受体细胞 三、重组DNA分子的模拟操作 1.材料用具:剪刀代表_______,透明胶条代表__________。 2.切割要点: (1)先分别从两块硬纸板上的一条DNA链上找出____________序 列,并选____之间作切口进行“切割”。 (2)然后再从另一条链上___________之间寻找EcoRⅠ相应的切 口剪开。 3.若操作正确,不同颜色的黏性末端应能_________;否则,说明 操作有误。 EcoRⅠ DNA连接酶 G-A-A-T-T-C G-A 互补的碱基 互补配对 1.判断正误 (1)限制酶切割产生的黏性末端和平末端在恢复时需用的DNA 连接酶可以不加选择。( ) 【分析】E·coliDNA连接酶只能连接黏性末端,而T4DNA连接 酶既可以连接黏性末端又可以连接平末端,所以必须进行选择。 (2)限制酶和DNA解旋酶的作用部位相同。( ) 【分析】限制酶作用于两个核苷酸之间的磷酸二酯键,DNA解 旋酶作用于碱基对的两个碱基之间的氢键。 (3)DNA连接酶起作用时不需要模板。( ) × × √ 2.问题思考 (1)不同的限制酶具有不同的识别序列,说明限制酶具有什么特点? 提示:专一性。 (2)作为运载工具的载体,要求必须对受体细胞无害,为什么? 提示:载体如果对受体细胞有害,其一旦被导入受体细胞,就会影响受体细胞的生命活动,甚至破坏受体的生命活动。 一、几种工具酶的作用比较 1.限制性核酸内切酶与DNA连接酶的比较: (1)区别: 用于基因表达载体的构建 在DNA片段之间重新形成磷酸二酯键 DNA连接酶 用于提取目的基因和切割载体　 使特定部位的磷酸二酯键断开　 限制性核 酸内切酶 应　用 作　用