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冰片促进葛根素和梓醇口服吸收入脑研究 　　[摘要]从细胞水平和动物水平考察冰片对葛根素和梓醇口服吸收及穿透血脑屏障入脑的影响，筛选适合梓葛复方口服制剂的冰片浓度。采用原代大鼠脑微血管内皮细胞和星型胶质细胞共培养建立体外血脑屏障模型，利用此模型研究62.5～100 mg?L-1冰片对葛根素、梓醇转运的影响。小鼠分别灌胃给予0，2.5，50，100 mg?kg-1冰片溶液后再立即灌胃给予葛根素（200 mg?kg-1）、梓醇（4.5 mg?kg-1）纳米晶混悬液，比较葛根素、梓醇在血浆和脑组织中的药动学参数。脑微血管内皮细胞和星型胶质细胞共培养7 d后，屏障功能基本形成。与未加入冰片组相比，冰片质量浓度为1.2.5～100 mg?L-1时，葛根素、梓醇跨血脑屏障模型的渗透系数显著增大（P005），冰片作用于共培养模型2 h后的跨内皮细胞电阻值极显著降低（P001）。小鼠灌胃50 mg?kg-1和100 mg?kg-1冰片能显著促进葛根素的口服吸收，但冰片对梓醇的口服吸收无显著影响。100 mg?kg-1冰片组葛根素的AUC脑/AUC血显著高于其余3组（P005），梓醇则是50 mg?kg-1组最高（P005）。就脑组织AUC而言，葛根素以100 mg?kg-1组最大，显著高于其余各组（P005）；梓醇以50 mg?kg-1组最大，但与100 mg?kg-1组无显著性差异。可见，冰片能促进葛根素、梓醇口服给药的入脑量，质量浓度以100 mg?kg-1为佳。 　　[关键词]冰片； 葛根素； 梓醇； 血脑屏障； 口服 　　血脑屏障（blood brain barrier，BBB）是存在于血液系统与脑组织之间的屏障系统。它的存在有利于维持脑内环境的相对稳定，但同时也阻碍了约98% 的小分子药物和几乎100% 的大分子药物向脑内的递送，成为脑部疾病诊断和治疗的主要阻碍。如何克服BBB，将药物有效的递送至脑内，成为脑部疾病药物治疗的关键和研究热点。 　　冰片是从龙脑香科植物龙脑香的树脂和挥发油中获得的结晶。《本草纲目》谓其可“通诸窍，散郁火”。历代医家都认为冰片“有引药上行，佐使之功”[1] 。现代研究证实，冰片能调节血脑屏障通透性，促进丹参酮[2]，栀子苷[34]，山柰酚[5]等药物透过血脑屏障；此外，冰片还能促进药物透过胃肠道上皮细胞，增加难溶性药物的口服吸收[6]。 　　葛根素是从豆科植物野葛Pueraria lobata（Wrilld）Ohwi中提取的一种水难溶性黄酮类化合物，梓醇是从玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Libosch中提取的一种强水溶性环烯醚萜类化合物。课题组已研究证实，葛根素与梓醇配伍可改善神经功能症状、促脑血管和神经元再生，对缺血性脑卒中有良好治疗效果[710]。但葛根素的脑靶向指数约为50%[11]，梓醇的脑靶向指数约为1.3%[1.2.1.3]，入脑浓度低，使其临床应用受到较大限制。 　　本研究分别从细胞水平和动物水平研究冰片对葛根素、梓醇口服吸收入脑的促进作用，并筛选适合梓葛复方口服制剂的较佳浓度，以期为将葛根素、梓醇开发成治疗缺血性脑卒中的口服中药新药奠定实验基础。 　　1材料 　　AB 1.3.5S天平（梅特勒?托利多仪器有限公司）；Milieell细胞电阻仪（美国MilliERS2Millipore公司）；荧光酶标仪（美国Gene5有限公司）；LC20A高效液相色谱仪（日本岛津公司）；API 4000质谱仪（AB SCIEX有限公司）；F6/106G超细匀浆器[弗鲁克（上海）流体机械制造有限公司]；TG1.6WS高速离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）；DZF6050真空干燥箱（上海齐欣科学仪器有限公司）。 　　葛根素（纯度98%，四川玉鑫药业有限公司，批号1.40602）；对羟基苯甲醛（纯度98%，上海源叶生物科技有限公司，批号YY91.2.50）；梓醇（纯度98%，石家庄流波白鸟生物科技有限公司，批号1.10808200508）；桃叶珊瑚苷（纯度90%，潮州市泽润制药有限公司，批号20101.11.2）；荧光素钠（纯度99%，上海源叶生物科技有限公司，批号YY1.1.3.902.5g）；甲醇、乙腈（色谱纯，Fisher公司）；其余试剂均为分析纯；冰片购自和平药房，经齐红艺教授鉴定，符合《中国药典》要求。 　　雌雄KM小鼠，清洁级，购于重庆市中药研究院实验动物研究所，生产许可证号SCXD（渝）201.30006，实验动物质量合格证号No0003.788。 　　2方法 　　2.1血脑屏障模型的建立 　　2.1.1细胞共培养模型的建立脑微血管内皮细胞（BMECs）的培养与种植参照文献[14]，从新生2周的乳鼠获取原代脑微血管内皮细胞，于3.7 ℃、5% CO