应用于染色体步移PCR扩增技术的研究进展.pdfVIP

维普资讯 遗 传 HEREDITAS(Beijing)28(5)：587~,595，2006 专 论 与 综 述 应用于染色体步移的 PCR扩增技术的研究进展 刘 博1,2，苏 乔’，汤敏谦 ，袁晓东 ，安利佳’ (1．大连理工大学环境与生命科学院，大连 116023}2．宝生物工程(大连)有限公司，大连 116600) 摘 要 ：各种建立在 PCR基础上染色体步移 的方法能够根据 已知的基 因序列得到侧翼的基因序列。染色体步移技 术主要应用于克隆启动子、步查获得新物种中基因的非保守区域、鉴定T—DNA或转座子的插入位点、染色体测序工 作 中的空隙填补 ，从而获得完整 的基 因组序列等方面 。其方法主要有 3种 ：反向PCR的方法 ，连接法介导的PCR 的方法 以及特异引物 PCR的方法 。文章就各种方法进行举例说明并加 以分析 比较 。 关键词 ：染色体步移 ；反向PCR；连接法 PCR；特异引物 PCR 中图分类号 ：Q75 文献标识码 ：A 文章编号=0253—9772(2006)05—0587—09 ProgressofthePCRAmplificationTechniquesforChromosomeWalking LIU Be’ ，SU Qiao’，TANG M in．Qian ，YUAN Xiao-Dong ，ANLi-Jia’ (1．SchoolofEnvironmentalandBiologicolScineceandTechnology，DalionUniversityof Technology。Dalian 116023，China；2．TaKaRaBiotechnology (Dalian)Co．，Ltd．Dal／no 116600，China) Abstrsct：VariousPCR-basedmethodsareavailableforchromosomewalkingfrOm aknownsequencetoanunknown region．Itisprmo isingingenome-relatedresearchforthefollowingexperiments：promotercloning，obtainingnon-corl- servativepartsofgenesinnew spe cies，identificationofT-DNAortransposno insertino sitesandfillingingapsorun- knownchrmo osmo eregionsingenmo eseque ncing．Thesemethodsconsistedofthreetype s：inversePCR，ligatino -me- diatedPCR andspe cificprimerPCR．Inthisreview ，we illustratedandcmo paredthecurrenttechniques． Keywords：chrmo osomewalking；inversePCR{ligation-mediatedPCR；specificprimerPCR 获得与已知序列相邻 的未知序列的染色体步移 经完成的少数物种 (如人 、小鼠、线虫、水稻、拟南芥 技术是一项重要的分子生物学研究技术。染色体步 等)来说，可以轻松地从数据库 中找到已知序列 的侧 移技术主要有 以下几方面的应用 ：(1)根据已知的基 翼序列 。但是这毕竟只是研究少数模式生物时的情 因或分子标记连续步移获取人、动物和植物的重要 况，对于 自然界 中种类繁多的其他生物而言 ，在不知 调控基因，用于研究结构基因的表达调控 ，如 ：分离 道它们 的基因组 DN