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双光子显微技术-陆军军医大学生物医学分析测试中心.PDF
THIRD MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
双光子显微技术
2014.3.11
刘洋
科研部生物医学分析测试中心
细胞组学室
共聚焦显微术的特点
双光子显微术的问世及特点
双光子显微术的应用
双光子显微术的最新发展
1959
Malvin Minsky 1985
Wijnaendts Van Resandt
检测器
Pinhole
1978
G. J. Brakenhoff 激光源
样品
普通显微镜成像
焦平面
标本
物镜
共聚焦显微镜成像
针孔
标本
物镜
microscope
共聚焦显微镜的优缺点
• 消除杂散光、高反差、横向分辨 • 针孔限制发射光收集、信号较弱
率高 • 激发光功率大，光毒性和光漂白
• 光学切片、三维重构 高
• 检测光谱可调，通道数多 • 激发光损耗大，不适用厚样本
• 扫范围可调，不同维度灵活组合
• 数据数字化，适于定量分析
• 可对样本进行激光操作
1931 1961 1990
Maria Goeppert-Mayer W. Kaiser and C. G. B. Garre Winfried Denk
出多光子吸收理论 首次实际验证 发明双光子共聚焦
双/多光子吸收
Two-/Multi-photon absorption (TPA/ MPA)
多光子激发特性
激发态 中间态寿命极短（10-17s，
0.01fs ）
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