DNA琼脂糖凝胶电泳0.pptVIP

实 验 二 DNA琼脂糖凝胶电泳 一、实验目的： 1、掌握琼脂糖凝胶电泳分离核酸的原理和方法。 2、学习核酸染色的方法。 二、实验原理: （一）电泳技术： 1、电泳定义：是指带电粒子在电场中向与其自身所带电荷相反的电极方向移动的现象。 根据电泳支持介质的不同，可分为滤纸，醋酸纤维薄膜，淀粉、琼脂糖、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。电泳技术的应用非常广泛，从分离小分子如氨基酸、肽、激素、核苷酸到复杂的大分子如蛋白质、核酸甚至病毒颗粒的分离鉴定都依赖于电泳技术。 （1）带电颗粒的大小和形状：颗粒越大，电泳速度越慢，反之越快； （2）颗粒的电荷数：电荷越少，电泳速度越慢，反之越快； （3） 溶液的粘度：粘度越大，电泳速度越慢，反之越快； （4）溶液的pH值：影响被分离物质的解离度，离等电点越近，电泳速度越慢，反之越快； 　　（二）琼脂糖凝胶电泳分离核酸的原理： DNAgreen核酸染料 DNAgreen是一种花箐类染料，具有安全、灵敏作为各种核酸电泳的染色剂。 DNAgreen最大吸收峰在510nm左右，另外在254-380nm还有一个吸收峰，与核酸结合后发射绿色荧光，因此在紫外凝胶透射仪上可以检测出DNA样品。 作为EB的一种替代品。 （1）核酸大小与琼脂糖凝胶电泳分离的关系