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第一章：生物大分子物质的制备 一、名词解释 1）生命大分子物质：通常指动物，植物和微生物在进行生长发育，新陈代谢是，所形成的蛋白质（包含酶）和核酸等有机化合物的总称。 2）有效成份是指欲纯化的某种单一的生命大分子物质。而有效成分以外的其它物质则统称杂质。 3）抽提:通常是指用适当的溶液进行反复萃取，逐步将原料中有效成分最大限度分离出来的过程。 4)分离纯化：根据要提取物质的特点制定合适的方案，从成分复杂、相互混合的抽提液中的得到单一的有效成分的过程。 二、简答题 1）常用于细胞破碎的方法有几种、破碎细胞的目的何在？ 机械破碎：（通过机械运动产生的剪切力，使组织、细胞破碎） a研磨法 b组织捣碎器法 c超声波法 d压榨法 e冻融法 非机械破碎 ： a）酶解法：(通过细胞本身的酶系或外加酶制剂的催化作用，使细胞外层结构受到破坏，而达到细胞破碎) 自溶法、外加酶制剂法。 )b) 化学法;(通过各种化学试剂对细胞膜的作用，而使细胞破碎) 有机溶剂法、表面活性剂、酸、碱处理法、EDTA螯合剂法。 c) 物理法:(通过各种物理因素的作用，使组织、细胞的外层结构破坏，而使细胞破碎)。包括 渗透压冲击法 、冻结-融化法 、干燥法。 细胞破碎的目的：细胞室生物体结构和功能的单位，通常人们所需要的物质有些分泌于细胞外，如淀粉酶和蛋白酶等就是分泌在胞外的培养液或所处环境中，用 适当的溶剂就可以提取;有些则存在细胞内部，如核蛋白和相关酶类鞥，其所含的酶又有游离酶和结合酶之分，前者游离在细胞质之中，后者则与细胞则与细胞器紧密结合。欲提取存在于细胞内的物质就需要把细胞破碎。一班动物细胞膜比较脆弱，极易破碎。而植物和微生物的细胞壁比较牢固，需要在提取钱进行专门的破碎细胞操作。 2）抽提的含义，方法。以及抽提有效成分的影响因子有哪些. 抽提的含义：抽提通常是指用适当的溶剂和方法从原材料中把有效成分分离出来的过程。 经过处理的原材料中的有效成分可用缓冲液、稀酸、稀碱、或有机溶剂（如丙酮、乙醇）等抽提，有时还可用蒸馏水抽提。 抽提的影响因子 在抽提阶段，pH值、溶剂的极性和离子浓度、水解酶、温度、搅拌、氧化、金属离子、因子抽提液与抽提物的比例等，可明显影响有效成分的性质和数量。 3）浓缩的方法：沉淀法、吸附法、超过滤法、透析法、加密呀蒸馏法、冰冻干燥法。 第二章:沉淀分离技术 一、名词解释 1) 盐溶: 一般在低盐浓度的情况下，蛋白质的溶解度随盐浓度的升高而增加，这种现象称为盐溶 2) 盐析: 而当盐浓度升高到一定程度后，蛋白质的溶解度又随着盐浓度的升高而降低，结果使蛋白质沉淀析出，这种现象称为盐析. 二）简答题 1）蛋白质的沉淀方法：盐析法、等电点沉淀法、有机溶剂沉淀法、选择性变性沉淀法、非离子多聚物沉淀法。 2）简述盐析法分离蛋白质的原理，以及影响盐析的因素，欲提高盐析效率应采取什么措施。 原理: 盐浓度增高到一定数值后，水活性降低，导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和，水化膜相继被破坏，最终引起蛋白质分子间相互聚集并从溶液中析. 影响蛋白质盐析的因素：（1）蛋白质浓度, （2）离子强度和离子类型的影响, （3）pH的影响, （4）温度的影响 操作过程中注意以下事项可以提高盐析效率: （1）添加的硫酸铵的纯度要高，添加后，要放30min以上使其充分溶解，且要不断搅拌，防止局部过浓，发生共沉淀； （2）同一溶液中欲分离几种蛋白质时，可采用分段盐析的方法。盐析通常与等电点沉淀法配合使用。 （3）选择好温度，一般在室温下进行； （4）蛋白浓度不易过高，一般25－30g/L；低浓度盐析，可用离心分离；高浓度盐析（70－80％），用过滤（因为粘度大，离心操作慢）；盐析沉淀得到的蛋白质含量较高，纯品需经脱盐处理，如透析，凝胶过滤等。 3)沉淀核酸有几种方法？在操作过程中如何防止其分子被损伤？ 常用的沉淀分离法有： (1)有机溶剂沉淀法 (2)等电点沉淀法 (3)钙盐沉淀法 (4)选择性溶剂沉淀法 制备具有生物活性的核酸，必须采用温和的条件，避免过激的反应环境，如过酸或过碱，避免剧烈搅拌，要求在低温下进行操作，并防止HYPERLINK /z/Search.e?sp=S%E6%A0%B8%E9%85%B8%E9%85%B6ch=w.search.yjjlinkcid=w.search.yjjlink \t _blank核酸酶的作用，可加入酶HYPERLINK /z/Search.e?sp=S%E5%8F%98%E6%80%A7%E5%89%82ch=w.search.yjjlinkcid=w.search.yjjlink \t _blank变性剂抑制其活性。 第三节 利用膜的分离技术 名