铁皮石斛组培讲义课件.ppt

生活家饮食保健孕期选择食用油的学问邢台市第四病院罕见护理应急预案猪气喘病综合防制技术动物营养系列理想蛋白与氨基酸模式的研究进展皮肤病的诊断包括病史体格检查和必要的实验室检查我国有关食物添加剂营养强化剂食物新资本的治理律例与标准 铁皮石斛的组织培养 第三小组 小组成员：贾静 周玉兰 郭朝慧 黄晓燕 葛亚琼 平然 付祥龙 陈曦林 （1）铁皮石斛的基本概念 （2）铁皮石斛的药用价值 （3）组培技术 一、铁皮石斛的基本概念： 1、概念： 铁皮石斛，为兰科多年生附生草本植物，石斛属。全世界兰科约有500属，15000多种，石斛属是兰科中最大的属之一。生于海拔达1600米的山地半阴湿的岩石上，喜温暖湿润气候和半阴半阳的环境，不耐寒。一般均能耐－5℃的低温。铁皮石斛为石斛之极品，它因表皮呈铁绿色而得名。铁皮石斛具有独特的药用价值，以其茎入药，中药名：石斛。 2、形态特征： 茎直立，圆柱形，长9-35厘米，粗2-4毫米，不分枝，具多节，节间长1-3-1.7厘米，常在中部以上互生3-5枚叶；叶二列，长圆状披针形，基部下延为抱茎的鞘，边缘和中肋常带淡紫色；叶鞘常具紫斑，老时其上缘与茎松离而张开，并且与节留下1个环状铁青的间隙。总状花序常从落了叶的老茎上部发出，具2-3朵花；浅白色，卵形，萼片和花瓣黄绿色，唇盘密布细乳突状的毛，并且在中部以上具1个紫红色斑块；蕊柱黄绿色，长约3毫米，花期3-6月。 二、铁皮石斛的药用价值： （1）增强免疫功能 （2）促进消化 （3）护肝利胆 （4）抗风湿 （5）降低血糖血脂降低血胆固醇和甘油三脂。 （6）抗肿瘤 （7）保护视力 （8）滋养肌肤 （9）抗衰老　 三、铁皮石斛的组培培养： 组织培养获得石斛再生植物株的途径 （1）器官发生型： 无菌短枝型(又称节培法） 芽增殖型 器官发生型 （2）原球茎发生型 器官发生型途径： 器官发生型通过外植体组织培养，使预先存在的分生组织形成芽(如腋芽)或不定分生组织(如子叶、茎段、愈伤组织等)形成不定芽。 原球茎发生型途径： 指通过石斛适宜外植体诱导产生胚性愈伤组织并增殖，随后形成类胚组织原球茎进而发育成完整的再生植株。 通常由种子离体培养产生的胚性组织称原球茎(protocorm)，而外植体叶尖、基尖等诱导形成的胚性组织称为拟原球茎(protocorm like bodies)即PLBs。原球茎或拟原球茎转入不含任何激素或生长素的培养基(如MS)便可再生出完整小植株。 通常铁皮石斛采用种子及茎段为外植体进行组培快繁 种子外植体培养： 种子胚萌发→愈伤组织诱导→原球茎诱导→原球茎分化→发芽等过程 种子诱导出无菌苗的时间在20~35天之间， 种子诱导率一般为75%~90% ， ·茎段外植体培养： 茎段→丛生芽→完整植株 茎段外植体自植入培养基中10天后，其茎节部芽体就出现突起，并产生丛生芽族，不仅生长快，而且芽体粗壮。 30天后能生成健壮完整的芽体，不需要经历原球茎诱导阶段 茎段诱导率为90%~98% ； 实验材料 石斛材料：选取1 年生铁皮石斛植株上生长健壮的茎段，摘去叶片和膜质叶鞘，剪成约2 cm长带节的小段。 培养基：常用的培养基为MS。 （1）芽增殖培养基：MS＋NAA0.1～0.5毫克／升＋BA0.5～2.0毫克／升； （2）壮苗培养基：MS无激素培养基； （3）生根培养基：1/2MS+IBA0.1毫克／升 茎段外植体培养 培养基附加物： （1）天然添加物 在基本培养基中加人香蕉汁、马铃薯汁、绿豆芽汁、苹果汁仁、椰子乳等能促进铁皮石斛幼苗的生长和根系的发育，香蕉汁的促进作用最为显著。（2）炭源 铁皮石斛在生根培养时加入活性炭有利于试管苗的生长，能使根系长得更加粗壮闭。唐桂香等认为在培养基中添加活性炭有助于提高试管苗的成活率，但对苗的根数和根长影响小。 培养条件 石斛组培常用的温度为(26±1) ℃ 光强1 600～2 000 lx 日照光8~12h/d （1）组培苗在光照度为2000lx ，温度以22 ℃ 为宜。 (2) 在20 一22 ℃ 时丛生芽增殖较好，温度超过25 ℃ 丛生芽就开始分化成苗。 实验步骤： ①原材料清洗 选择生长旺盛、无病害的铁皮石斛健康植株，每2 节为一段放入500ml 的烧杯中，加入少量洗衣粉，用纱布单层棚扎杯口，然后用工程线扎紧，放在自来水龙头下冲洗30min，冲水量调整到能使铁皮石斛茎段在水中漂动为好。 主要作用是洗去外表尘土和大颗粒菌落、菌丝等。 ②材料二次消毒灭菌 将上述完成后的材料带到无菌室超净工作台上，进行二次消毒灭菌: 将茎段腋芽的苞叶拨去。 70% 的酒精速浸25s， 用0.