第4章-生物碱.ppt

(6).采用色谱法进行分离 当用一些简便方法还未能达到分离的目的时，往往采用柱层析法进行分离，常用氧化铝、硅胶作吸附剂，根据吸附能力不同而达到分离的目的。还可用离子交换层析法根据碱性强弱不同而分离。有时也可用凝胶层析，根据分子量大小不同进行分离。 上述分离所得单体纯度的检查：薄层层析检查必须是单一斑点；结晶经重结晶后晶体均匀，色泽均匀，熔距短(1~2℃以内)；1H-NMR及MS谱中无杂质信号；必要时再经GC与HPLC检查纯度。 五. 生物碱的鉴定和结构测定 1.已知生物碱的鉴定 (1) 物性测定 测定化合物的熔沸点、比旋光度等物理常数，与已知生物碱的物理常数比较。 (2) 层析分析 常用薄层层析，纸层析，可用几种溶剂尝试，对照其Rf值。 例薄层层析：软板常用氧化铝，展开剂为苯、氯仿。硬板常用硅胶，展开剂为苯、氯仿、石油醚。如生物碱中极性基团多，则可在展开剂中加适量乙醇或丙酮。 纸层析：以水为固定相，或将甲酰胺加到滤纸上作固定相；苯+氯仿+乙酸乙酯作为移动相。 常用显色剂：都可用碘化铋钾或碘化铂钾。前者多显橙红色；后者则不同(例吗啡显蓝色；蛇根碱显红棕色；阿托品显蓝紫色；乌头碱显红棕色)。 大多生物碱的Rf值可查，但随溶剂不同易变化。如有标样则可与标样作共同分析，确定是否为同一物。 (3).谱学特征分析 与文献中所列化合物的紫外光谱、红外光谱、核磁共振谱、质谱的谱学特征进行对照，以确定是否为该化合物。 紫外光谱（UV）：生物碱的UV谱反映了其基本骨架或生色基团的结构特点。生色基团在分子的非主体部分，UV谱不能反映分子的骨架特征，对测定结构作用有限。生色基团在分子的整体结构部分，生色基团组成分子的基本骨架与类型，如吡啶、喹啉、吲哚类生物碱，UV谱可反映生物碱的基本骨架与类型特征，且受取代基的影响很小，对生物碱骨架的测定有重要的作用。 红外光谱（IR）：主要用于官能团的定性和与己知生物碱对照鉴定。例酮基在1690cm-1左右区域的振动吸收，3735,1296cm-1显示酚羟基的吸收等。 核磁共振谱（NMR）：NMR谱是生物碱结构测定中最强有力的工具之一。氢谱可提供有关官能团（如NCH3、NC2H5、NH、OH、CH3O、C=C、Ar-H等）和立体化学的许多信息。碳谱、高分辨氢谱和2D-NMR谱，所提供的结构信息的数量和质量，是其它光谱方法所难于比拟的。因此核磁共振谱是生物碱结构测定中应用最广的方法。 质谱(MS)：由于生物碱结构不同，有不同的裂解方式，产生不同的离子峰。难于裂解或由取代基或侧链的裂解产生的M+或M+-1多为基峰或强峰，一般观察不到由骨架裂解产生的特征离子。以氮原子为中心的α-裂解，多涉及骨架的裂解，且基峰或强峰多是含氮的基团或部分。 2. 未知生物碱的结构测定 (1) 化学降解反应 化学降解反应是经典的结构测定方法，其方法很多，对生物碱而言，Hoffman分解反应(彻底甲基化反应）是最常用的方法，可了解氮原子的结合状态，基本明确生物碱的骨架，当然随着物理方法的广泛应用，目前这种化学降解方法已用得很少。 例： 再例： 思考题：毒芹的活性成分是一种叫毒芹碱的生物碱。从下面所示的反应过程中推测毒芹碱(C8H17N)的结构式。 (2) 物理方法 通过元素分析，四谱，X单晶衍射光谱等分析，确定化合物的结构。 例防已碱：分子式C19H23O4N，为酚性生物碱，m.p. 161℃，[α]D -70○(乙醇)。 紫外光谱 263nm( lgε3.79)显示四氢异喹啉吸收； 红外光谱 3735,1590,1296cm-1显示苯酚吸收，1700cm-1显示α,β-不饱和酮吸收； 1H-NMR(CDCl3)显示：NCH3δ2.34(3H,s)， -OCH3δ3.40(3H,s)， ArOCH3δ3.70(3H,s)， AB芳香质子δ6.56,6.44(均为1H,d, J=7Hz)， 烯质子δ5.40(1H,s)及酮基邻位CH2δ2.30, 2.40 (各1H,d,J=14Hz)。 六. 有代表性的生物碱 1.胡椒碱 胡椒碱为白色晶体，m.p. 130℃。碱性极弱，不易与酸结合，不溶于水与石油醚，易溶于氯仿、乙醇、乙醚、苯、醋酸中。由于结构中共轭链较长，因此具有抗氧化性，扩张胆管等作用。 胡椒碱为酰胺衍生物，有如下反应： 从结构式可知，胡椒酸有四种顺反异构体，熔点分别为134~136℃，154~156℃，200~202℃，215~217℃。分子对称性高，则熔点高。上述