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色谱联用 第一，色谱-质谱联用 一．质谱法的特点： 1.被分析的样品首先要离子化。 2.通过测定样品离子质荷比（m/z）来进行定性定量分析。 3.质谱是分子离子及碎片离子的质量与其相对强度的谱, 谱图与分子结构有关； 4.质谱法可提供分子量, 确定分子式。 5.质谱法进样量少, 灵敏度高, 分析速度快； 二．质谱仪的结构： 质谱仪是通过对样品电离后产生的具有不同的 m/z 的离子来进行分离分析的。 质谱仪包括： 1．进样系统: 进样系统的作用是高效重复地将样品引入到离子源中并且不能引起真空度的降低。进样方式： 1）直接进样;2）仪器联用的进样（GC、LC、CE） 2．电离系统：离子源的作用是使样品分子变成离子，将离子聚焦，并加速进入质量分析器。 质谱检测的是离子；离子源即为接口。 离子化方式： 电子轰击电离 Electron Impact Ionization EI （应用最广泛） a)原理: 由GC或直接进样杆进入的样品，以气体形式进入离子源，由灯丝发出的电子与样品分子发生碰撞使样品分子电离。 b)特点： ? 所有的标准质谱图都是在70 eV下做出的。而一般有 机化合物的电离电位是10 eV。 ? 有机物分子可能被打掉一个电子形成分子离子，确定 化合物分子量；也可能会发生化学键的断裂形成碎片 离子，得到化合物的结构信息。 2）化学离子化 Chemical Ionization CI a) 有些化合物稳定性差，用EI方式不易得到分子离子，这时采用CI电离方式。CI源工作过程中要引进一种反应气体。气体经过电子轰击，产生离子，再与试样相互碰撞，产生准分子离子。 b)特点: ·最强峰为准分子离子； ·谱图简单； ·不适用难挥发试样。 3）电喷雾电离 Electrospray Ionization ESI ESI是一种软电离方式，即便是分子量大，稳定性差的化合物，也不会在电离过程中发生分解，它适合于分析极性强的有机化合物。ESI最大特点是容易形成多电荷离子。 可以测量大分子量的蛋白质。 4）场电离，场解吸 Field Ionization, Field Desorption FI、FD a) 特点： ·强电场将分子中拉出一个电子； ·分子离子峰强； ·碎片离子峰少； ·不适合化合物结构鉴定。 b)局限性：要求样品分子处于气态，灵敏度不高，应用逐渐减少。 5）快原子轰击 Fast Atom Bombardment FAB （主要用于磁式双聚焦质谱仪） a)氩气在电离室依靠放电产生氩离子，高能氩离子经电荷交换得到高能氩原子流，氩原子打在样品上产生样品离子。电离过程中不必加热气化，因此适合于分析大分子量、难气化、热稳定性差的样品。 b) 缺点：混合物样品中共存物质的干扰，它们常常会抑制分析物的离子化，造成灵敏度下降甚至根本没有信号产生。 6）基质辅助激光解析电离 Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization MALDI （适用于生物大分子） MALDI可使热敏感或不挥发的化合物由固相直接得到离子。 待测物质的溶液与基质的溶液混合后蒸发，使分析物与基质成为晶体或半晶体，用一定波长的脉冲式激光进行照射时，基质分子能有效的吸收激光的能量，使基质分子和样品分子进入气相并得到电离。 7）大气压化学电离 Atmospheric Pressure Chemical Ionization APCI ①APCI喷嘴的下游放置一个针状放电电极，通过放电电极的高压放电，使空气中某些中性分子电离，产生H3O+，N2+，O2+ 和O+ 等离子，溶剂分子也会被电离，这些离子与分析物分子进行离子-分子反应，使分析物分子离子化。 ②APCI主要用来分析中等极性的化合物。 ③APCI主要产生的是单电荷离子，很少有碎片离子，主要是准分子离子。可以认为APCI是ESI的补充。 3.质量分析系统： 质量分析器是质谱仪的核心, 质量分析器的作用是将离子源产生的离子按m/z顺序分开并排列。 不同类型的质量分析器构成不同类型的质谱仪: 单聚焦磁场分析器 离子进入分析器后，由于磁场的作用，其运动轨道发生偏转改作圆周运动。在一定的B、V下，不同m/z 的离子其R不同，由离子源产生的离子，经过分析器后可实现质量分离。 四级杆质量分析器 只有质荷比满足要求的离子才能通过四级杆到达检测器。其它离子则撞到四级电极上而被“过滤”掉。四极杆质谱结构简单，价廉，体积小，易操作，扫描速度快， 适合于GC-MS, LC-MS，但分辨率不高。 离子阱质量分析器 特定m/z离子在阱内一定轨道上稳定旋转，改变端电极电压，不同m/z离子飞出阱到达检测器； 飞行时间质谱仪 ·m/z小的离子，漂移运动的速度快，最先通过漂移管;