柑橘原生质体融合-电融合-Bio-protocol.PDF

/e1010186 DOI:10.21769/BioProtoc.1010186 柑橘原生质体融合-电融合 Citrus Protoplast Electrofusion 刘丹，郭文武* 园艺植物生物学教育部重点实验室，园艺林学学院，华中农业大学，武汉 *通讯作者邮箱：guoww@ 引用格式：刘丹，郭文武. (2018). 柑橘原生质体融合- 电融合. Bio-101 e1010186. Doi: 10.21769/BioProtoc.1010186. How to cite: Liu, D. and Guo, W. W. (2018). Citrus protoplast electrofusion. Bio- 101 e1010186. Doi: 10.21769/BioProtoc.1010186. (in Chinese) 实验原理：细胞融合即细胞核来源于一个亲本，线粒体基因组或叶绿体基因组来源于另 一个亲本的融合方式。在柑橘中，我们采用电融合。在交流电作用下，双亲原生质体迅 速平行排成多个串珠，随后在直流电作用下，部分小串珠开始解体又融合在一起，形成 新的圆球体。细胞融合能有效克服有性杂交不亲和以及远缘杂交障碍等困难，突破生殖 隔离。 关键词：基因组，电融合，原生质体 材料与试剂 1. 滤纸 2. 玻璃器皿 (90 mm) 3. 双圈定性滤纸 (中速) 4. 生根管 5. 刀片 6. 专用细胞培养皿 7. 玻璃离心管 8. 长吸管 9. 0.22 μm 醋酸纤维微孔滤膜 10. 橡皮筋 Copyright © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC. 1 /e1010186 DOI:10.21769/BioProtoc.1010186 11. 封口膜 12. 活性炭 13. 锡箔纸 14. 柑橘种子 15. 柑橘胚性愈伤 16. 75%酒精 17. 3% NaClO 18. NaOH 19. FDA 20. 纤维素酶R-10 (Yakult Honsha) 21. 离析酶R-10 (Yakult Honsha) 22. DMSO 23. Sucrose 24. 椰子汁20 ml 25. 6-Benzylaminopurine (6-BA) 26. Kinetin (KT) 27. Naphthalene acetic acid (NAA) 28. Indole-3-acetic acid (IAA) 29. KOH 30. KH PO 2 4 31. KNO3 32. MgSO4 33. CuSO4 34. CaCl ·2H O 2 2 35. NaH PO ·2H O 2 4 2 36. 甘露醇 37. BH 营养液配制所需试剂： 3 1) 麦芽提取物 2) 蔗糖 3) 谷氨酰胺 4) 七水合硫酸镁 Copyright © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC. 2 /e1010186 DOI:10.21769/BioProtoc.1010186 5) 磷酸二氢钾 6) 二水合氯化钙 7) 氯化钾 8) 水解酪蛋白 9) 碘化钾 10) 硼酸 11) 二水合钼酸钠 12) 五水合硫酸铜 13) 六水合氯化钴 14) 一水合硫酸锰 15) 乙二胺四乙酸 16) 七水合硫酸亚铁 17) 肌醇 18) 果糖 19) 核糖 20) 木糖 21) 甘露糖 22) 鼠李糖 23) 纤维二糖 24) 半乳糖 25) 丙酮酸钠盐 26) 柠檬酸 27) 苹