GB/T 18980-2003乳和乳粉中黄曲霉毒素M1的测定　免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法.pdf

ICS67.100.10 X 04 GB/T18980-2003 乳和乳粉中黄曲霉毒素M,的测定 免疫亲和层析净化高效液相色谱法 和荧光光度法 DeterminationofaflatoxinM1contentinmilkandmilkpowder- Cleanupbyimmunoaffinitychromatogaphyanddeterminationby high-performanceliquidchromatigraphyandfluorometer (ISO 14501:1998，IDT) 2003-02-21发布 2003-08-01实施 中 华 人 民 共 和 国 国家 质量 监督 检 验检 疫 总 局 发 布 GB/T18980-2003 前 言 本标准的免疫亲和层析净化一高效液相色谱法等同采用ISO14501;1998乳《和乳粉中黄曲霉毒素 M 免疫亲和层析净化高效液相色谱法》。 本标准免疫亲和层析净化一荧光光度法快速测定乳和乳粉中黄曲霉毒素M,o 本标准中的附录A为资料性附录 本标准由北京市质量技术监督局提出。 本标准由全国食品工业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位:北京市产品质量监督检验所、青岛出人境检验检疫局、国家标准物质研究中心。 本标准主要起草人:王晶、张鹏、张艺兵、邵明武。 本标准为首次发布。 GB/T18980-2003 乳和乳粉中黄曲霉毒素M,的测定 免疫亲和层析净化高效液相色谱法 和荧光光度法 免疫亲和层析净化高效液相色谱法 1.1 范围 本标准适用于乳、乳粉，以及低脂乳、脱脂乳、低脂乳粉和脱脂乳粉中黄曲霉毒素M,含量的测定。 乳粉中的最低检测限是。.08pg/kg，乳中的最低检测限是。.008pg/l 1.2 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 1.2.1 黄曲碑毒索M，含， at7atoxinM,content 通过本标准所测定出的本物质的质量含量。 注:黄曲霉毒素M、的含量以微克/升伽g/L)或微克/千克(fig/kg)表示。 1.3 原理 试样通过免疫亲和柱时，黄曲霉毒素M 被提取。亲和柱内含有的黄曲霉毒素M、特异性单克隆 抗体交联在固体支持物上，当样品通过亲和柱时，抗体选择性的与黄曲霉毒素M,(抗原)键合，形成抗 体一抗原复合体。用水洗柱除去柱内杂质，然后用洗脱剂洗脱吸附在柱上的黄曲霉毒素M,，收集洗脱 液。用带有荧光检测器的高效液相色谱仪测定洗脱液中黄曲霉毒素M,含量 1.4 试荆 除非特别声明，所用试剂为分析纯;使用蒸馏水、去离子水或其他相当纯度的水。 1.4.1免疫亲和柱:应该含有黄曲霉毒素M 的抗体。亲和柱的最大容量不小于100ng黄曲霉毒素 M,(相当于50ml浓度为2pg/l的试样)，当标准溶液含有4ng黄曲霉毒素M,(相当于50mL浓度为 80ng/l的试样)时回收率不低于80 。应该定期检查亲和柱的柱效和回收率，对于每个批次的亲和柱 至少检查一次(见 和) 柱效检查 用移液管((1.5.4)移取1.0m工_的黄曲霉毒素M,储备液(()到20mL的锥形试管中 (1.5.9)。用恒流的氮气(1.4.3)将液体慢慢吹干，然后用10ml.10%的乙睛()溶解残渣，用力 摇荡。 将该溶液加人到40mL的水中，充分混匀，全部通过免疫亲和柱。按说明书要求使用免疫亲和柱。 淋洗免疫亲和柱后，洗脱下黄曲霉毒素M,。将洗脱液进行适当稀释后，用高效液相色谱仪测定免疫亲 和柱键合的黄曲霉毒素M,含量。 计算黄曲霉毒素M,的回收率，将其结果与1.