GB/T 19182-2003咖啡　咖啡因含量的测定　高效液相色谱法.pdf

GB广C19182-2003/ISO10095;1992 前 言 本标准等同采用国际标准ISO10095:1992《咖啡— 咖啡因含量的测定— 高效液相色谱法》。 本标准由中华人民共和国农业部提出. 本标准由农业部热带作物及制品标准化技术委员会归口。 本标准起草单位:华南热带农产品加工设计研究所。 本标准主要起草人:黄和、程雪梅、叶英。 本标准为首次发布。 GB/T19182-2003/ISO10095:1992 咖啡 咖啡因含t的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定用高效液相色谱测定普通的和脱咖啡因的生咖啡和焙炒咖啡豆，以及普通的和脱咖啡 因的咖啡抽提粉中的咖啡因含量的一种方法。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注 日期的引用文件，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 ISO1447:1978 生咖啡— 水分含量的测定(常规法) ISO3726:1983 速溶咖啡— 在70℃减压条件下减重的测定 ISO4072袋装咖啡取样 ISO6670 衬里箱装速溶咖啡取样 ISO6673:1983 生咖啡— 在105℃下减重的测定 3 原理 将试料放人水中，加热至90*C，在有氧化镁存在的条件下，抽提咖啡因并过滤，然后用苯基改性二 氧化硅微柱将全部抽提液纯化。使用配有紫外检测器的高效液相色谱仪测定其咖啡因含量。 4 试荆 除非另有规定，只能使用确认的分析级试剂，以及燕馏水或脱矿物质水或与之等效纯度的水。 4.1 甲醉，液相色谱级。 4.2 氨溶液(0.3mot/L):甲醇,90:10体积混合液. 4.3 洗提溶剂，纯化柱用，甲醇 :水 ;乙酸，75;25:I体积混合液。 4.4 流动相，甲醇 :水，30，70体积混合液。 取600mL甲醇(4.1)倒人2L单标容量瓶内，加水至刻度，混合后棍合液用孔径为0.45pm过滤 器过滤。 4.5 乙醇 ，水，1，4体积混合液。 4.6 氧化镁. 4.7 咖啡因储备液:相当于每升含0.5g咖啡因溶液。称取125-mg咖啡因，精确至0.1mg，放入250 mL棕色玻璃容量瓶内，并用乙醇 :水(4.5)加至半满，咖啡因溶解后，再加相同的乙醇 :水混合液到 刻度。 该溶液在冰箱内可保存一个月。 4.8 咖啡因标准溶液A，相当于每升含。.010g咖啡因，用于脱咖啡因的产品。 将储备液(4.7)加温至室温后，用吸移管((5.12)吸取2mL移人 100ml,单标容量瓶内，用水补充至 刻度并摇匀。 该溶液于当日配制使用。 GB/T19182-2003八SO10095:1992 4.9 咖啡因标准溶液B，相当于每升含。.05g咖啡因，用于普通的产品。 将储备液((4.7)加热至室温后，用吸移管(5.12)吸取5mL移人50mL单标容量瓶内，并用水补充 至刻度并摇匀。 5 仪器 普通实验室仪器，特别是下列各项。 5.1 高效液相色谱仪，配有紫外检测器，允许使用的波长在254nm至280nm之间。装有一台带刻度 记录纸的记录仪。测定时最好选择接近280nm处，因为咖啡因最大吸收波长是在272nm, 5.2 高效液相色谱用的色谱柱CIE型，最好是微球粒，并至少具有5000个理论塔板数的性能。 一条柱的理论塔板数N，可以根据注人纯咖啡因标准溶液，而得到的峰形进行如下计算。 N一5.54(wa..s2 … … ，.·，，·… … ， ‘〔1) 式中: t- 峰的保留时间; 二-一 半峰宽度。 5.3 纯化往，用于反相色层(分离)法。柱的容量3ml,，是用于微粒平均大小为40Pm苯基改性的二氧 化硅填充。 注:在反相层析中，用苯基改性的3mLBakerSPE柱是一种可在市场买到的适