GB/T 17819-1999维生素预混料中维生素B12的测定　高效液相色谱法.pdf

GB/r17819--1999 前 台 维生素预混料中维生素B}}测定方法尚无国际标准。本标准参考 《色谱科学杂志》第15卷和洲封罗 纳普朗克动物营养公司提出的分析方法，该法简捷、快速、准确，在技术内容上采用其中技术条件，在编 写规格上，依据GB/T1.11993标《准化工作导则 第1单元:标准的起草与表述规则 第I部分:标 准编写的基本规定》和GB/T1.4-1988《标准化工作导则 化学分析方法标准编写规定》。 本标准的附录A是标准的附录。 本标准由全国饲料工业标准化委员会提出并归口。 本标准由国家饲料质量监督检验中心(北京)负责起草。 本标准主要起草人:李兰、陈必芳、梁冬生。 中华人民共和 国国家标准 维生素预混料中维生素B12的测定 CB/r 17819一1999 高效液相色谱法 DeterminationofvitaminB,Zinvitaminspremix一 High-pressureliquidchromatography 1 范围 本标准规定了用高效液相色谱法测定维生素预混料中维生素B12的方法。 本标准适用于维生素预混料、维生素B,z预混制剂中维生素B,z的测定。检测范围为每千克样品中维 生素B,含量大于。.25mg, 方法原理 试样中维生素B,:用水提取，经高效液相色谱反相柱分离，其峰面积与维生素B,。的含量成正比 试剂和材料 本标准所用试剂除特殊注明外，均为优级纯，水为去离子水。 11 乙睛:色谱纯。 3.2 正磷酸溶液 3.3 25%乙醇溶液 3.4 维生素B,标准溶液。 3.4.1维生素B。标准贮备溶液:准确称取。.1000g维生素B,:纯品(符合USP),溶解于100MI乙醇 溶液(3.3)中，并稀释定容至刻度，摇匀。该标准贮备液每毫升含维生素B,,Img. 3.4.2维生素B,z标准工作液:准确吸取维生素B,z标准贮备液(3.4.1)1mL于50MI容量瓶中，用移 动相稀释定容刻度，摇匀。该标准工作液1MI含维生素BV2A(ge 4 仪器、设备 4.1 实验室常用设备。 4.2 超声波水浴。 4.3 高效液相色谱仪，带自动进样器，紫外可调波长检测器。 4.4 超纯水装置 4.5 离心机:3000r/min. 5 试样制备 取具有代表性样品至少500g，用四分法缩分至100g，粉碎圣·部过0.28mm孔卜混匀，装入样品 瓶内密闭，避光低温保存备用。 国家质量技术监督局1999一08一10批准 2000一02一01实施 GB/T17819-1999 6 分析步骤 6.1 提取 6.1.1 维生素预混料中维生素B。的提取 称取试样2^-3g(精确至士。.0001g)，置于100mL棕色容量瓶中，加约60mL去离子水，在超声 波水浴中超声提取15min，取出，用去离子水定容至刻度，混匀，过滤，滤液过。.45fam滤膜，供高效液 相色谱仪分析。 6.1.2 维生素B二制剂(1%-2%)的提取 称取试样1g(精确至士。0001g)于100mL棕色容量瓶中，加人约60mL去离子水，在超声波水 浴中超声提取10min，取出用去离子水定容过滤。精确吸取1.00mL溶液于50mL棕色容量瓶中，用去 离子水定容至刻度，该液通过。.45pm滤膜过滤，供高效液相色谱仪分析 6.2 测定步骤 6.2.1色谱条件 柱子:p.-BondpakNH,,粒度5pm,3.9mmX300mm. 柱温:30C。 流动相:3%正磷酸水溶液260mL与700mL乙膀混合，超声脱气。 流速:1.7mL/min, 检测波长:361nm, 6.2.2 定量测定 按高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数，用两次以上相应标准工作液，对系统进行校正。 将通过。.45p=滤膜的样液((6.1.1)依次分装于自动进样小瓶中，依外标法上液相色谱仪测定 6.2.3 也可采用反相离子对高效液相色谱测定维生素B,,的方法(见附录A) 7 测定结果的计算