GB/T 17818-1999饲料中维生素D3的测定　高效液相色谱法.pdf

GB/r17818-1999 前 言 饲料中维生素D 的测定目前尚无国家标准和国际标准，本标准是参照美国公职分析化学家协会 AOAC(1995年版)混《合饲料、预混合物和宠物食品中维生素D3液相色谱法》及瑞士罗氏药品化学有 限公司维生素研究部发表的饲《料中维生素和类胡萝 卜素— 一现代分析方法尸用高效液相色谱法测定 配合饲料和预混合饲料中维生素D3”而制定的。在技术内容上参照两法，在编写格式上依据 GB/T1.1-1993标《准化工作导则 第1单元:标准的起草与表述规则 第1部分:标准编写的基本规 定》和GB/T1.4-1988标《准化工作导则 化学分析方法标准编写规定》。 为了使饲料中维生素D3测定方法科学、准确、经济、实用，适合于我国不同实验室大量饲料样品的 测定，在参照国外分析方法的基础上，增加了反相色谱测定条件。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。 本标准由国家饲料质量监督检验中心(北京)负责起草。 本标准主要起草人:陈必芳、赵小阳。 中华人 民共和 国国家标准 饲料中维生素D3的测定 高效液相色谱法 GB/T 17818-1999 DeterminationofvitaminD3infeeds- High-pressureliquidchromatography 1 范围 本标准规定了饲料中维生素D3的测定一一高效液相色谱法 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、复合预混料和维生素预混料中维生素D3的测定 测量范围为每 千克样品中含维生素D3(胆钙化醉)的量在5001U以上。 2 引用标准 下列标准所包含的条文.通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均 为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 GB/T6682-1992分析实验室用水规格和试验方法 3 方法原理 用碱溶液皂化试验样品，乙醚提取未皂化的化合物，蒸发乙醚，残渣溶解于甲醇并将部分溶液注入 高效液相色谱净化柱中除去干扰物，收集含维生素D,淋洗液馏分，蒸发至干，溶解于正己烷中，注入高 效液相色谱分析柱，用紫外检测器在264nm处测定，通过外标法计算维生素D。的含量 当样品中维生素D。标示量超过每千克10000IU时，可省去高效液相色谱净化柱，试验溶液直接 注入色谱分析柱分析。 4 试剂和材料 除特殊注明外，本标准所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水，色谱用水为去离子水，符合GB/T6682 用水的规定。 4，无水乙醚:无过氧化物。 4.1.1过氧化物检查方法 用5mi乙醚加1MI.10%碘化钾溶液，振摇Imin，如有过氧化物则放出游 离碘，水层呈黄色。若加。.500淀粉指示液，水层呈蓝色。该乙醚需处理后使用。 4.1.2 去除过氧化物的方法:乙醚用5%硫代硫酸钠溶液振摇，静置，分取乙醚层，再用蒸馏水振摇洗 涤两次，重蒸，弃去首尾5%部分，收集馏出的乙醚，再检查过氧化物，应符合规定 4.2 乙醇 4.3 正己烷:重蒸馏(或光谱纯)。 4.4 1,4一二氧六环。 4.5 甲醉:优级纯。 一 一 一 ，，，，，，，，，，，一 ‘ 国家质量技术监督局，999一08一10批准 2000一02一01实施 GB/T17818-1999 4.6 2,6- 叔i一基对甲酚(BHT) 4.7 无水硫酸钠 4.8 氢氧化钾溶液500g/1 4.9抗坏血酸乙醇溶液5g/1:取。.5g抗坏血酸结晶纯品溶解于4m工温热的蒸馏水中.用乙醇稀释 至100mL，临用前配制。 4.10 氯化钠溶液100g/Lo 4.11 维生素D,标准济液 4.11门 维生素D:标准贮备液:准确称取50.0mg维生素D,(胆钙化醇)USP结晶纯品，于50mL棕 色容童瓶中，用正己烷溶解并稀释至刻度，4℃保存。该贮备液的浓度为每毫升含1mg维生素D,. 4.11.2 维生素D:标准工作液:准确吸取维生素D。标准贮备液((4.11.1)，用正己烷按1:100比例稀 释，该标准溶液浓度为每