111基因工程原理.ppt

二、基因工程的操作程序 目的基因的获得 重组载体的构建 重组载体的转化和筛选 目的基因的表达和鉴定 获取目的基因的方法 　用限制酶切断成许多片段 ⑴直接分离法 ——鸟枪法 　用限制酶将完整的DNA随机切成许多片段，然后用某种检测方法挑选出所需要的基因。如用“核酸探针法”，核酸探针是用放射性同位素标记的DNA单链，具有非常特异的脱氧核苷酸序列，能与DNA互补链结合。　　 ⑵人工合成法——反转录法和化学合成法 反转录法 ： mRNA→单链DNA→双链DNA（目的基因） 化学合成法： 氨基酸序列→基因序列→合成目的基因 返回 运载工具——载体(质粒) 用与提取目的基因相同的限制酶切割质粒使之出现一个切口，将目的基因插入切口处，让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后，在DNA连接酶的作用下连接形成重组DNA分子。 提取质粒并用限制酶切割 用连接酶将目的基因和质粒连接 重组载体的构建 目的基因与质粒的连接 返回 重组载体的转化和筛选 转化方法： 基因枪法、显微注射法和花粉管通道法。 受体是动物细胞时最常用的是显微注射法，是植物细胞时常用基因枪法。 筛选： 利用载体上的标记基因，借助选择培养基进行筛选。 将目的基因导入受体细胞 有表达产物(导入） 无表达产物（未导入） 选择培养基（载体标记基因） 返回 目的基因的表达和鉴定 基因工程成功的标志： 目的基因表达，进而产生相应的性状。 鉴定： 检测转化的生物有没有显示出目的基因控制的性状。 　　例：用转基因棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明目的基因未表达；如虫吃后中毒死亡，则说明目的基因表达。 返回 课本知识回顾 基因工程又叫做 或 。通俗地说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种 提取出来，加 以 ，然后放到另一种生物的细胞里， 改造生物的遗传性状。 基因拼接技术 DNA重组技术 基因 修饰改造 定向地 DNA 重组技术的基本工具 “分子手术刀” ── “分子缝合针” ── “分子运输车” ── 限制酶 DNA连接酶 基因进入受体细胞的载体 限制性核酸内切酶 主要是从 的一种酶。 识别双链DNA 分子的某种 ，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的 断开。 形成两种末端 原核生物中分离纯化出来 特定的核苷酸序列 磷酸二酯键 粘性末端 平末端 二、 “分子缝合针” —— DNA连接酶 1、种类： 2、作用部位： 两类 E·coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 磷酸二酯键 基因进入受体细胞的载体 通常有三种: 在进行基因工程操作中,真正被用作载体的质粒都是在 基础上进行过 的 质粒 λ噬菌体衍生物 动植物病毒 天然质粒 人工改造 1.如图所示为部分双链DNA片段，下列有关基因工程中工具酶功能的叙述错误的是 (　　) A．切断a处的酶为限制性核酸内切酶 B．连接a处的酶为DNA连接酶 C．切断b处的酶为DNA解旋酶 D．连接b处的酶为RNA聚合酶 课堂反馈 D 2．下列有关基因工程操作的叙述中，正确的是 A．用同种限制性核酸内切酶切割载体与目的基 因可获得相同的黏性末端 B．以蛋白质的氨基酸序列为依据合成的目的基因与原基因的碱基序列相同 C．检测到受体细胞含有目的基因就标志着基因工程操作的成功 D．用含抗生素抗性基因的质粒作为载体是因为其抗性基因便于与外源基因连接 A 3．下列一般不作为基因工程中的标记基因的是 (　　) A．四环素抗性基因 B．绿色荧光蛋白基因 C．产物具有颜色反应的基因 D．贮藏蛋白的基因 D 4．质粒作为“分子运输车”的条件是 (　　) ①能够自我复制　②双链环状DNA分子　③有多个限制性核酸内切酶切割位点　④有标记基因　⑤真核细胞中没有 A．①②③④⑤ B．①②③④ C．①③④ D．②③⑤ B 5．下列关于基因表达载体构建的相关叙述，不正确的是 (　　) A．需要限制性核酸内切酶和DNA连接酶 B．