植物生物工程学实验一植物愈伤组织培养).pdf

植物生物工程实验 综合实验一 植物愈伤组织培养及其应用 郝大海 实验目的 掌握培养基母液配制方法 掌握培养基配制方法 熟悉无菌材料继代、繁殖操作 熟悉愈伤组织诱导、再分化技术 熟悉试管苗移栽、定植技术 实验原理 植物组织培养是指植物的任何器官、组织 或细胞，在人工预知的控制条件下，放在 含有营养物质和植物生长调节物质等组成 的培养基中，使其生长、分化并形成完整 植株的过程。其理论依据是植物细胞具有 全能性。 母液配制 在植物组织培养工作中，通常先配制一系 列母液，即贮备液。所谓母液是欲配制液 的浓缩液，这样不但可以保证各物质成分 的准确性及配制时的快速移取，而且还便 于低温保藏。 二、培养基的成分 水 分 成 基 养 培 无机盐 有机物 植物激素 培养体的支持材料 其它辅助性物质 培养基配制 培养基的成分 （一）水 水是植物原生质体的组成成分，也是一切代谢 过程的介质和溶媒。它是生命活动过程中不可缺少 的物质。 配制培养基母液时要用蒸馏水，以保持母液及 培养基成分的精确性，防止储藏过程发霉变质。大 规模生产时可用自来水。但在少量研究上尽量用蒸 馏水，以防成分的变化引起不良效果。 （二）无机元素(inorganic element) 无机营养成分就是人们平常所说的矿物质、 无机盐或无机元素。它们在植物生活中具有非常 重要的作用。 如氮（N）、硫（S ）、磷（P）是蛋白质、 氨基酸、核酸和许多生物催化剂即酶的主要或重 要组分。它们与蛋白质、氨基酸、核酸和酶的结 构、功能、活性等有直接的不可缺少的关系。 （二）无机元素(inorganic element) 根据植物对这些元素需要量的不同或者根据目前 植物培养基中添加的这些元素量的大小，可将它们分 成大量元素和微量元素。 大量元素一般指在培养基中的浓度大于0.5mmol/L 的元素（或﹥100mg/L）。 微量元素 指小于0.5mmol/L （或﹤100mg/L）的元 素。 培养基的成分—— 大量元素 1. 大量元素 主要包括氮、磷、钾、钙、镁和硫六种。 (1) N 是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱 等的组成成分，是生命不可缺少的物质。 在制备培养基时 以硝态氮（NO3-N)或氨态氮（NH4+-N)两种形式供应。大多 数培养基既含有硝态氮（NO3-)又含有氨态氮（NH4+) 。氨态 氮（NH4+-N)对植物生长较为有利。供应的物质有KNO 、 3 NH NO 等。有时，也添加氨基酸来补充氮素。 4 3 缺氮时某些植物的愈伤组织会出现一种很引人注目的 花色素苷的颜色，愈伤组织内部不能形成导管。 培养基的成分—— 大量元素 (2) P 是磷脂的主要成分。而磷脂又是原生质、细胞核的重要 组成部分。磷也是ATP 、ADP等的组成成分。 在植物组织培养过程中，向培养基内添加磷，不仅增加 养分、提供能量，而且也促进对N 的吸收，增加蛋白质在植 物体中的积累。