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子宫内膜腺癌中MMP2MMP9表达免疫组化研究 　　【摘要】 目的：探讨基质金属蛋白酶-2、-9（Matrix metalloproteinases，MMP）在子宫内膜腺癌组织中的表达及其与临床病理关系。方法：应用免疫组化SP法检测MMP-2、MMP-9在不同子宫内膜组织中的表达情况。结果：MMP-2在正常子宫内膜、子宫内膜增生症和子宫内膜腺癌组织中的阳性表达率分别为15.0%、26.7%、88.0%，MMP-9的阳性表达率分别为25.0%、33.3%、95.0%，MMP-2和MMP-9的表达在子宫内膜腺癌中均明显高于正常子宫内膜、子宫内膜增生症，比较差异均有统计学意义（P0.05）。MMP-2、MMP-9的表达强度与子宫内膜腺癌的手术-病理分期、组织学分级、肌层浸润和淋巴结转移相关，差异均有统计学意义（P0.05）。结论：MMP-2、MMP-9在子宫内膜腺癌的发生、发展过程中起促进作用，且两者表达与子宫内膜腺癌的浸润深度和转移程度有关，为早期诊断子宫内膜腺癌以及子宫内膜腺癌的预后判断、靶向治疗提供了可靠的依据。 　　【关键词】 MMP-2； MMP-9； 子宫内膜腺癌； 免疫组化； 肿瘤； 转移 　　在过去20年中，子宫内膜腺癌的发病率呈逐年上升的趋势。2010年美国估计新发子宫内膜癌43 470例，同期宫颈癌只有12 200例[1]。虽然传统的手术、放化疗等多种治疗措施的综合应用已显著地提高了患者的生存质量，但子宫内膜腺癌的浸润和转移仍是许多患者死亡的主要原因。继续认识子宫内膜腺癌肿瘤细胞的生物学行为，探讨其浸润和转移的机制，开发新的抗肿瘤药物，是目前亟待解决的问题。目前关于MMPs在子宫内膜癌中的研究较多[2-6]，但研究结果不一致，目前仍存在争议。本研究采用免疫组化方法检测MMP-2、MMP-9在不同子宫内膜组织中的表达，研究子宫内膜腺癌的相关生物学行为，探讨两者与子宫内膜腺癌的发生、发展和浸润转移的相关性，为子宫内膜腺癌的早期临床诊断和预后判断、靶向治疗提供理论依据。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 收集蓬莱市人民医院2010年1月-2013年12月手术切除、经病理确诊的100例子宫内膜腺癌组织蜡块和30例子宫内膜增生组织蜡块，同期因无症状子宫肌瘤行子宫全切除术的20例正常子宫内膜作为对照组。子宫内膜腺癌患者年龄37～68岁，平均（50.67±7.93）岁，所有患者在手术前均未放化疗或内分泌治疗，不合并其他部位的恶性肿瘤，病例资料查询提示每组患者的孕产史差异无统计学意义。所有切片染色后均经病理证实，子宫内膜腺癌病例采用国际妇产科联盟（FIGO 2009年）标准进行手术病理分期以及组织学分级，其中手术-病理分期组中Ⅰ期58例、Ⅱ期22例，因Ⅲ、Ⅳ期均为晚期，合并两期病例共为20例；组织学分级：G1 65例、G2 24例、G3 11例。肌层浸润1/2者61例，肌层浸润≥1/2者39例；无淋巴结转移者80例，有淋巴结转移者20例。 　　1.2 检测方法及原理 所有标本均经固定、包埋、切片，采用免疫组织化学SP（链霉素抗生物蛋白-过氧化酶）方法检测。步骤按试剂盒说明书严格操作。第一抗体：MMP-2、MMP-9鼠抗人单克隆抗体（北京中杉金桥生物技术有限公司）、第二抗体：即用型免疫组化S-P试剂盒、DAB显色试剂盒（北京中杉）。实验原理：应用免疫学基本原理-抗原抗体反应，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肤和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究。MMP-9另需要做抗原热修复。 　　1.3 MMP-2、MMP-9阳性的评价标准 以细胞膜和/或细胞浆出现明显的黄色或棕黄色颗粒为阳性细胞，其染色深度的评分标准参照Shimizu等[7]的方法，根据每张病理切片的细胞内着色的强度，如无着色、淡黄色、棕黄色、棕褐色分别评分为0、1、2、3分；将着色阳性细胞的面积按无着色、着色2/3分别评分为0、1、2、3分。再计数子宫内膜腺癌肿瘤细胞的总数和阳性表达的细胞数，最后表达强度的结果就由染色细胞数和染色深度的共同评分来评价，两者评分相加作为该切片的最终评分，以评价细胞中两者的表达强度。评分由低到高分为4级，0～1分为（-），2～3分为（+），4～5分为（++），6分为（+++）。其中0～1分为阴性，2～3分为弱阳性，4～5分为阳性，6分为强阳性。 　　1.4 统计学处理 所有数据采用SPSS 17.0统计学软件进行统计分析，表达阳性率的比较采用字2检验（chi-square）和Fisher精确概率检验法，表达强度的比较采用多组有序分类资料的Kruskal Wallis H秩和检验，以P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 不同子宫内膜组织