2007-DC肿瘤治疗幻灯片.pptVIP

树突状细胞 (dendritic cells, DC) 是功能最强的APC，能有效摄取、加工及提呈抗原，刺激初始型T细胞的增殖和活化，是启动、调控并维持免疫应答的中心环节。 将DC修饰成为一种“自然”疫苗正成为一种能激发强大而持久抗肿瘤免疫应答新的手段。充分理解DC的生物学特性则有助于制备更为有效的免疫治疗疫苗。 1. DC的形态和表面标志 若要鉴定所得到的细胞是否为DC，往往是通过形态学、组合性细胞表面标志、MLR中刺激初始型T细胞增殖三个方面加以综合判断，即具有典型树突状形态、膜表面高表达MHCⅡ类分子、能够移行到淋巴器官和刺激初始型T细胞活化增殖，并具有一些相对特异性表面标志的一类细胞 2. DC的来源及分化成熟 DC分为髓系和淋巴系两大群体 人髓系DC是近年来研究和运用最被关注的DC亚群，业已在肿瘤免疫中得到广泛应用 人髓系DC主要包括：从CD34+造血细胞诱导分化获得的；从单核细胞诱导获得的Mo-DC；存在于皮肤、呼吸道上皮及消化道粘附上皮的郎罕氏细胞（LC） 6. DC的体外培养及应用 DC 在组织中含量甚微，细胞表面缺乏特征性的标志，不易与其它细胞分离。细胞来源的困难一度限制了对DC生物学特性等方面的深入研究 目前用于临床和实验研究的DC大多是通过体外分离DC的前体细胞，在含有有关细胞因子的培养体系中诱导获得 如何在体外获得大量的功能性DC是DC疗法治疗肿瘤需要解决的关键环节 骨髓、脐血、外周血CD34+细胞或外周血单个核细胞均可作为体外培养DC的来源 适当的细胞因子配伍和应用顺序对DC的培养具有重要作用 树突状细胞疗法是具有潜在应用前景的肿瘤免疫治疗手段 国外早在1995年已开展了DC治疗肿瘤的Ⅰ期临床试验,国内直到2006年开展了应用DC肿瘤疫苗进行肿瘤治疗的临床试验； 综合近年来对不同肿瘤的Ⅰ/Ⅱ临床试验结果，总的说来，多数能够产生一定的治疗效果。尤其表现在前列腺癌和恶性黑色素瘤，目前已经进行到Ⅱ/Ⅲ期的临床治疗方案，临床缓解率基本上可以达到30％。 其他肿瘤，包括结肠癌、乳腺癌、卵巢癌、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、脑胶质瘤、肾细胞癌等也已经开始了DC的临床应用，其疗效因肿瘤的不同而各异。 DC抗肿瘤免疫治疗的主要机制 肿瘤特异性抗原的有效递呈 诱导产生大量效应T细胞 启动效应T细胞迁移到肿瘤部位 保持效应T细胞在肿瘤部位的长期存在 抑制肿瘤血管的生成 DC与肿瘤免疫逃逸 DC能否与已存在的肿瘤接触从而摄取并加工肿瘤抗原，有实验证实，某些肿瘤细胞低表达GM-CSF，抑制DC向肿瘤部位迁移； 肿瘤细胞通过分泌细胞因子抑制DC向淋巴结迁移； 早期的肿瘤细胞不产生LPS、TNF-α等细胞因子，当肿瘤细胞的增殖到达一定程度，细胞出现坏死、凋亡或周围组织有炎性浸润时，DC才被激活，而此时肿瘤已无法为免疫系统所控制； 肿瘤细胞分泌的IL-10、TGF-β、VEGF等抑制DC的分化发育和功能 1. DC的来源 CD34+ 造血干细胞来源的DC 单核细胞来源的DC 患者外周血中分离获得的DC 肿瘤细胞来源的DC ——CD34+ 造血干细胞来源的DC 骨髓、脐带血中含有相对较多的CD34+细胞，在GM-CSF和TNF-?的微环境中诱导2周后，能够分化为CD1a+CD83+HLA-DR++的成熟DC，加入IL-4可以增加DC细胞的纯度，但不能够扩增产量，但FL、SCF或IL-3能够大大提高收获的DC细胞量；CD34-DC可能比Mo-DC具有更强的抗原提呈能力 诱导往往需要两步法，需要大量的细胞因子，花费较高。此外适合患者HLA配型的骨髓与脐带血的获得也有一定的难度 ——单核细胞来源的DC GM-CSF和IL-4（或IL-13）可以诱导CD14+的单核细胞向DC分化 ，加入TNF-?、CD40L或单核培养基可以促进DC成熟 在数量上Mo向DC分化没有扩增效应，但外周血中含有大量的Mo并且可以通过其贴壁特性而分离，经体外诱导培养的DC可以避免肿瘤微环境的抑制作用，所以为多数临床试验采用。用GM-CSF动员后的外周血中单核细胞的比例更高，并且含有一定数量的前体细胞，能够获得增殖 DC可由外周血单个核细胞直接诱导而来，和贴壁细胞来源的DCs相比，PBMC来源的DCs表达更高的共刺激分子CD86、CD40和MHC-П类分子 ——患者外周血中分离获得的DC 从外周血中直接分离DC，简单快速，可以不经过体外长期培养的过程直接获得，并且具有较强的同种刺激T细胞增殖的活性 但DC在外周血中的比例很低（在未经动员的情况下，只占到PBMC的0.15%~0.7%，或(3~17)×106 DC/L 血液），不能够获得足够的细胞量限制了其使用；某些肿瘤患者来源的血液DC，可能存在数量上的减少和功能上的缺陷 ——