8 细菌感染实验室检查应用.pptVIP

人工免疫两种 人工被动免疫注意事项 1. 试述检测病原菌的基本程序和原则？ 2.病原菌的诊断主要方法与手段 * 第八章 细菌感染的检查方法与防治原则 第一节 细菌感染的诊断 细菌学诊断(bacteriological diagnosis) 血清学诊断(serological diagnosis) 检测病原菌及其抗原、核酸、代谢产物等 检测患者血清中特异抗体 细菌学诊断(bacteriological diagnosis) 标本的采集和运送 无菌采集：避免杂菌污染 注意运送、保存、检查等过程的标记 不同疾病/不同病程采集不同标本 采集病变明显部位 早期采集:疾病早期/用抗菌素以前 第一节 细菌感染的诊断 及时送检：标本必须新鲜 细菌学诊断(bacteriological diagnosis) 细菌检查方法 形态与结构的检查 分离培养与鉴定 抗原物质的检测 其他检测方法 第一节 细菌感染的诊断 细菌学诊断(bacteriological diagnosis) 形态与结构的检查 细菌个体形态与结构的检查 细菌的菌体形态、排列、染色性 染色 单染： 复染： 特殊染色： 第一节 细菌感染的诊断 细菌学诊断(bacteriological diagnosis) 形态与结构的检查 革兰染色法（Gram stain）： 方法：初染 媒染 脱色 复染 原理： 1、G+菌等电点低于G-菌，吸收带正电荷的碱性燃料多 2、G +菌细胞壁肽聚糖层多，G-菌细胞壁脂质含量高 3、G+菌含有多量核糖核酸镁盐与结晶紫、碘结合成大分子复合物 医学意义： 1、鉴定细菌 2、与致病性有关 3、参考选择抗菌药物 第一节 细菌感染的诊断 细菌学诊断(bacteriological diagnosis) 形态与结构的检查 抗酸染色（acid-fast stain） 方法：1、石炭酸复红初染：加热3~5min，水洗 2、3%~5%盐酸酒精脱色30s，水洗 3、碱性美蓝复染30s，水洗。 4、干后镜检 结果： 抗酸杆菌 红色 非抗酸杆菌 蓝色 原理：分枝杆菌属的细菌，胞壁脂质多，其中的分枝菌酸与 石炭酸复红结合成牢固的复合物，能抵抗脱色。 第一节 细菌感染的诊断 细菌学诊断(bacteriological diagnosis) 分离与鉴定 分离： 固体平板— 分区划线法— 单个菌落 菌落形态：大小、光滑度、透明、溶血性 鉴定： 形态特征 生化反应 血清学鉴定 动物试验 药物敏感试验 第一节 细菌感染的诊断 细菌学诊断(bacteriological diagnosis) 抗原的检测 优点： 分离、培养细菌困难的情况下； 已经使用了抗生素、细菌已被抑制/杀死； 可检测微量的抗原 常用方法： 沉淀反应 协同凝结试验 免疫荧光法 对流免疫电泳 酶免疫法 免疫印迹法 第一节 细菌感染的诊断 细菌学诊断(bacteriological diagnosis) 病原菌核酸的检测 优点： 分离、培养细菌困难的情况下；检测病原菌的特异性基因及序列 常用方法： 核酸杂交技术 PCR技术 基因芯片技术 第一节 细菌感染的诊断 标记已知序列的核酸单链作为探针 已知序列一对特异寡核苷酸作为引物 血清学诊断(serological diagnosis) 抗体的检测 原理：用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特异性 抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。。 原则： 双份血清； 与该地区的抗体效价的正常值比较； 恢复期血清中抗体效价比急性期血清中抗体效价升高≥4倍者 第一节 细菌感染的诊断 血清学诊断(serological diagnosis) 抗体的检测 常用方法： 凝集试验： 补体结合试验： 中和试验： 肥达试验、外斐试验、显微镜凝集试验等 抗“O”试验等 Q热柯克斯体抗体检测