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胶原样凝集素COLLECTIN 郑州大学医学院免疫学与微生物学教研室 李付广 一、凝集素（LECTIN）的分类 C-型凝集素: 需要Ca2+维持活性的凝集素 S-型凝集素: 巯基依赖或β-半乳糖结合的凝集素 二、胶原样凝集素历史上的重要发现 1906 conglutinin; first animal lectin to be associated with the immune system 1989-1991 mannan-binding lectin 1999 collectin liver 1(CL-L1) 2001 collectin placenta 1(CL-P1) 2003 collectin kidney 1(CL-K1) 三、胶原样凝集素的一般特性 四、胶原样凝集素的结构 （一）一级结构特点 1. N端富含半胱氨酸区段：7-28氨基酸，其中1-3半胱氨酸 2. 胶原样区：53-177氨基酸(-Gly-Xaa-Yaa-)n重复序列, Xaa、Yaa多为脯aa或羟脯aa 3. 颈区：24-28氨基酸，α-helice coiled-coils 4. 糖识别区（CRDs）：与相应的糖配体结合 (二)三级结构 1.同源三聚体的形成(亚单位) 相同的三条肽链形成类似郁金香花朵 2.亚单位进一步聚集成寡聚体 单体CL-43, CL-L1 四聚体SP-D, Conglutinin, CL-46(十字形结构) 六聚体SP-A, MBL (一束郁金香花) (三)糖结合特异性 胶原样凝集素的凝集素样活性存在于CRDs, 由三个氨基酸基序决定: 1.甘露糖结合基序: Glu-Pro-Asn 2.半乳糖结合基序: Gln-Pro-Asp 所有胶原凝样集素(SP-A除外)均具有甘露糖特异基序Glu-Pro-Asn, SP-A第三位的氨基酸由Arg(狗)或Ala替换Asn. 系统树 (五)结合微生物种类 五、胶原样凝集素在宿主防御方面的生物学功能 （一）凝集作用 通过桥联，可使病原微生物凝集成大块，加强呼吸道黏膜纤毛清除作用，阻止病原吸附到细胞表面，抑制其定居和侵入，促进吞噬作用。 （二）补体激活作用 1. MBL产生 病原微生物感染早期 刺激激活 巨噬细胞和中性粒细胞 TNF-,IL-1,IL-6 急性期反应 肝细胞 MBL, CRP 2.MBL途径(lectin pathway) MBL与病原微生物表面的mannose, fucose, GlcNAc结合启动的补体激活级联反应 (三)调理作用 1.collectin的受体 见下表 2.collectin直接作为调理素 3.激活补体成分 C4b, C3b, iC3b 4.吞噬作用的激活 (四)抑制微生物的生长 SP-A,SP-D直接引起微生物细胞壁通透性增强,导致微生物生长抑制或死亡 (五)调节炎症反应 调节前炎症因子的合成分泌 (六)调节特异性免疫 DCs抗原提呈, DCs成熟, T细胞增殖 (七)调节过敏反应 SP-A,SP-D抑制IgE与过敏原结合, 抑制过敏早期组织胺释放, 抑制晚期支气管炎症中淋巴细胞增殖 (八)对细胞凋亡的影响 SP-A抑制Ⅱ型肺泡细胞凋亡, SP-A、SP-D,、MBL刺激凋亡细胞清除 Human CL-L1的研究 1999年Ohtani k.等克隆和鉴定出一个编码新的胶原凝集素基因，称肝脏胶原凝集素1（collectin liver 1， CL-L1），该基因定位于第八号染色体的长臂上，其基因结构由6个外显子（EX1～EX6）和5个内含子（IN1～IN5）组成，cDNA含有831bp插入片段，编码277个氨基酸残基。推测的氨基酸序列具有典型的胶原凝集素结构：N端富含半胱氨酸区、胶原样区、颈部和糖识别区。　　 CL-L1与其他胶原凝集素相比，具有独特之处，MBL、SP-A和SP-D基因定位于第10号染色体，而CL-L1基因定位于第8号染色体，C末端具有4个重复的赖氨酸结构，CRD和颈区由一个外显子编码，胶原样区有5个外显子编码。胶原凝集素绝大多数为分泌型，存在于体液和分泌液中，只有CL-L1为可溶性胞浆内蛋白，因此推测CL-L1可能具有独特的功能。 Comparison of three constructs Neck+CRD△kkkk Growth of standard E. coli expressi