第六章氨基与核酸发酵.pptVIP

⑵温度及降温速度。谷氨酸的溶解度随温度的降低而变小， 使谷氨酸从发酵液中结晶析出。为了有利于形成?-型结晶，结 晶温度要低于30℃。且降温要缓慢，以形成较大的结晶颗粒。 ⑷投晶种与育晶。在晶核形成以前，适时投放一定量的晶种，有利于收率的提高。生产上根据发酵液中谷氨酸的含量和pH来确定投种时间，一般谷氨酸含量在5％左右、pH4.0～4.5时投晶种；谷氨酸含量在3.5％~4.0％、pH为3.5~4.0时投晶种。投种量一般为发酵液的0.2％~0.3％。 ⑶加酸。加酸的主要目的是调节发酵液的pH，使其达到谷氨酸的等电点。加酸速度的快慢对晶体的大小影响很大。在生产上，一般要求前期加酸稍快，中期(晶核形成前)加酸要缓，后期加酸要慢，使pH缓慢降到等电点为止。 ⑸搅拌。适当搅拌有利于晶体长大，使菌体大小均匀一致。搅 拌还可以减少结晶粒子的互相黏接，避免晶簇的形成。搅拌转速 与设备直径和搅拌浆叶大小有关，一般以20~30r／min为宜。 (二)等电点提取工艺的操作要点 1.加酸调等电点 将发酵液排入等电桶后，测量温度、pH和谷氨酸含量，然后搅拌冷却，待液温降至30C时，加盐酸调pH。 前期加酸稍快，1h左右将发酵液的pH调至5.0。中期加酸要缓慢， 约经2h，发酵液的pH接近4.0-4.5时，观察晶核形成情况。当 ⑹菌体。发酵液中残存菌体的大小及多少，因菌种的不同而异。AS.l.542菌的菌体大，数量少，质量轻，相对地说，容易同谷氨酸结晶分离。 发酵液若染噬菌体，色泽深灰甚至发红，黏度增大，泡沫多谷氨酸的纯度和收率较低。 能目视发现晶核时，要停止加酸，育晶1～2h，使晶核壮大。此后加酸速度要慢，直到pH为3.0-3.2时，停止加酸，继续搅拌20h结束。整个中和温度要缓慢下降，不能回升。 最终温度越低越好。 2.沉降分离 将中和好的发酵液静置沉淀4～6h，放出上清液，然后将谷氨酸结晶沉淀层表面的少量菌体细麸酸清除，放另一缸中回收利用，底部的谷氨酸结晶取出后，离心分离。 * * 全世界AA的年需求量10%的速度增长，年总产量120万吨以上，而其需求量达800万吨。作为食品添加剂占40%，饲料添加剂占40%，医药保健品占20%。年产值已接近600亿美元。 1999年国内氨基酸产值30亿元，2000年达40亿元。目前用于AA输液的18种AA原料药品种，14种已工业化，原料药生产厂家从1989年的8家发展到现在的40多家。AA生产企业有100多家，年产量3万吨左右。 * 1866年德国的Ritthausen博士利用硫酸水解小麦面筋，分离到一种酸性氨基酸，原料取材，命名为谷氨酸。1910年日本的味之素公司用水解法生产谷氨酸。1956年日本协和发酵公司分离到谷氨酸棒杆菌，1957年开始发酵法生产味精。我国1958年开始研究，1965年在上海天厨味精厂投产 生产氨基酸的大国为日本和德国。 日本的味之素、协和发酵及德国的德固沙是世界氨基酸生产的三巨头。它们能生产高品质的氨基酸,可直接用于输液制剂的生产。 日本在美国、法国等建立了合资的氨基酸生产厂家,生产氨基酸和天冬甜精等衍生物。 国内生产氨基酸的厂家主要是天津氨基酸公司,湖北八峰氨基酸公司,但目前无论生产规模及产品质量还难于与国外抗衡。 在80年代中后期,我国从日本的味之素、协和发酵以技贸合作的方式引进输液制剂的制造技术和仿造产品,1991年销售量为二千万瓶,1996年达六千万瓶,主要厂家有无锡华瑞,北京费森尤斯,昆明康普莱特,但生产原料都依赖进口。 2000年后,世界氨基酸产值已达45亿美元,占生物技术市场的7%,国内的氨基酸产值可达40亿元,占全国发酵产业总产值的12%。 * * * * 提问：通过该生物合成途径，我们最希望的理想途径是什么？（封闭TCA环和封闭DCA环，有葡萄糖酵解产生的丙酮酸直接合成乙酰辅酶A和草酰乙酸合成柠檬酸到异柠檬酸到α-酮戊二酸到谷氨酸。 * * * * * * * * * * * * * * * * c、生物素对氮代谢的影响 VH丰富时，出现“只长菌，不产酸”的现象 GA发酵过程中，前期，菌体的增殖期，一定的量的生物素是菌体增殖所必需的；而在产物合成期，则要限制生物素的浓度，以保证产物的正常合成。 防止 关于氮代谢的调节： 控制谷氨酸发酵的关键之一就是降低蛋白质的合成能力，使合成的谷氨酸不能转化成其他氨基酸或参与蛋白质合成。 在生物素亚适量的情况下，几乎没有异柠檬酸裂解酶，琥珀酸氧化能力弱，苹果酸和草酰乙酸脱羧反应停滞，在铵离子适量存在下，生成积累谷氨酸。生成的谷氨酸也不通过转氨作用生成其他氨基酸和合成蛋白质。 在生物素充足的条件下，异柠檬酸裂解酶活性增强，琥珀酸氧化能力增强，丙酮酸氧化力加