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第四章 酶促反应动力学 根据化学动力学，反应速率通常以单位时间、单位反应体系中某一组分的变量来表示。对均相酶的催化反应，单位反应体系常用单位体积表示。 反应的速率可表示为 rs：底物S的消耗速率（mol/L﹒s） rp：产物P生成速率（mol/L﹒s） v：反应体系的体积（L） ns、np：底物S和产物P的质量（mol） t：时间（s） 对米氏方程的讨论： 当[s]Km时，　　 属一级反应。 当[s]Km时，　　 ，属零级反应。 当[s]＝Km时，　　 。Km在数量上等于反应速度达到最大反应速度一半时的底物浓度。 （1）米氏常数的意义 ① 是酶的一个特性常数： 的大小只与酶的性质有关，而与酶浓度无关。 值随测定的底物浓度、反应的温度、pH及离子强度而改变。 ②根据km值可以推断酶和底物的亲和力。如果酶的专一性不高，可催化几种底物发生反应时，km值最小的就表示酶与这一底物的亲和力最大，反之，则最小。 ③根据km值，可以估计胞内基质浓度，如 时， 。那么只要稍微改变基质浓度， 的变化就很 大，即反应速率对基质浓度改变的敏感性很大，如果 或 时，基质浓度相差1000倍，但反应速率只增加一倍，即在生理上保持 是没有意义的。 ④若已知某个酶的Km值，就可以计算出在某一底物浓度时，其反应速率相当于Vmax的百分率。 ⑤ Km值可以帮助推断某一代谢反应的方向和途径。催化可逆反应的酶，对正逆两向底物的Km不同。 在一定的酶浓度下，酶对特定底物的Vmax也是一个常数。 当[s]很大时， Vmax=K3『E]。Vmax与K3成线性关系，而直线的斜率为K3。 K3 表示当酶被底物饱和时每秒钟每个酶分子转换底物的分子数，这个常数又叫转换数（简称TN)，通称催化常数（catalytic constant, kcat). Kcat值越大，表示酶的催化效率越高。 四、酶动力学图解法 要建立一个完整的动力学方程，必须通过动力学实验确定其动力学参数。对Michaelis-Menten方程，就是要确定rmax（或k+2）和km值。但直接应用Michaelis-Menten方程求取动力学参数所遇到的主要困难在于该方程为非线性方程。为此常将该方程加以线性化，通过作图法直接求取动力学参数。 双倒数法应用广泛，但有两个缺点： 1、选用基质浓度不宜等量增加，否则在作图时，点都会集中在纵轴附近，难于正确作图。基质浓度以选用1.0、1.11、1.25、1.43、1.67、2.0、2.5、3.33，5和10等为宜，这样倒数值几乎是等量递增的。 2、反应速率测定稍有误差，其倒数值误差必将扩大，特别是在低浓度基质测定时，引起的误差更大，这样将影响直线斜率，影响 rmax及Km值 的测定。 竞争性抑制动力学的主要特点： 竞争性抑制剂的抑制程度取决于[S]，[I]，Km和KmI，当[I]增加，或KI减小，都会使KmI值增大，使酶与底物的结合能力下降，活性复合物减少，因而使底物反应速率下降。若[I]不变，增加[S]，抑制程度降低；若[S]不变，增加[I]，抑制程度增加。在一定的[S]和[I]条件下，KI值越低，抑制程度越大。 抑制剂的解离常数 由此可看出，KI愈小，表明抑制剂与酶的结合力愈强，对酶催化反应能力的抑制作用就越强。 当酶的活性部位与一个抑制剂分子相结合时，KmI与[I]的关系为一直线，可称为线型竞争抑制；如果酶的活性部位与两个以上的抑制剂分子相结合，则与的关系为一抛物线，可称为抛物线型竞争抑制。 如果SEI也能分解为产物， 同样可整理 出形式与 类似的速率方程式，所不同的只 是rI,max所包含的参数上。如何判断复合物SEI是否分解为产物，可通过改变抑制剂用量并测定底物的反应速率来判断。当[I]增加到某一程度，rSI减小直至趋于0，则为SEI不能分解为产物；如果随着[I]的增加，rSI趋于一定值，则SEI能分解为产物。 一、 未反应时的热失活动力学 了解未反应时酶的热稳定性关系到酶的保存。测定酶未反应时的热稳定的方法，是在一定条件下，使酶溶液恒温保持一定的时间，然后在最适宜的pH和温度下测定残存的酶活力，即残存酶活。 该模型又称为一级失活模型。以E和D分别表示活性酶与