工业微生物产生菌分离筛选心得.pdfVIP

宝枫林 工业微生物产生菌的分离筛选 菌株分离（separation）就是将一个混杂着各种微生物的样品通过分离技术区分开，并 按照实际要求和菌株的特性采取迅速、准确、有效的方法对他们进行分离、筛选，进而得到 所需微生物的过程。菌株分离、筛选（screening）虽为两个环节，但却不能绝然分开，因为 分离中的一些措施本身就具有筛选作用。工业微生物产生菌的筛选一般包括两大部分：一是 从自然界分离所需要的菌株，二是把分离到的野生型菌株进一步纯化并进行代谢产物鉴别。 在实验工作中，为使筛选达到事半功倍的效果，总的说来可从以下几个途径进行收集和 筛选： （1）向菌种保藏机构索取有关的菌株，从中筛选所需菌株。 （2）由自然界采集样品，如土壤、水、动植物体等，从中进行分离筛选。 （3）从一些发酵制品中分离目的菌株，如从酱油中分离蛋白酶产生菌，从酒醪中分离 淀粉酶或糖化酶的产生菌等。该类发酵制品经过长期的自然选择，具有悠久的历史，从这些 传统产品中容易筛选到理想的菌株。 菌株的分离和筛选一般可分为采样、富集、分离、产物鉴别几个步骤。 第一节 含微生物样品的采集 自然界含菌样品极其丰富，土壤、水、空气、枯枝烂叶、植物病株、烂水果等都含有众 多微生物，种类数量十分可观。但总体来讲土壤样品的含菌量最多。 一、从土壤中采样 土壤由于具备了微生物所需的营养、空气和水分，是微生物最集中的地方。从土壤中几 乎可以分离到任何所需的菌株，空气、水中的微生物也都来源于土壤，所以土壤样品往往是 首选的采集目标。一般情况下，土壤中含细菌数量最多，且每克土壤的含菌量大体有如下的 递减规律：细菌（108）放线菌（107）霉菌（106）酵母菌（105）藻类（104）原生 动物（103），其中放线菌和霉菌指其孢子数。但各种微生物由于生理特性不同，在土壤中的 分布也随着地理条件、养分、水分、土质、季节而有很大的变化。因此，在分离菌株前要根 据分离筛选的目的，到相应的环境和地区去采集样品。 （一）根据土壤特点 1 ．土壤有机质含量和通气状况 宝枫林 一般耕作土、菜园土和近郊土壤中有机质含量丰富，营养充足，且土壤成团粒结构，通 气饱水性能好，因而，微生物生长旺盛，数量多，尤其适合于细菌、放线菌生长。山坡上的 森林土，植被厚，枯枝落叶多，有机质丰富，且阴暗潮湿，适合霉菌、酵母菌生长繁殖，微 生物数量相应也比较少。 从土层的纵剖面看，1 ～5cm 的表层土由于阳光照射，蒸发量大，水分少，且有紫外线 的杀菌作用，因而微生物数量比5 ～25cm 土层少；25cm 以下土层则因土质紧密，空气量不 足，养分与水分缺乏，含菌量也逐步减少。因此，采土样最好的土层是5 ～25cm。一般每克 土中含菌数约几十万到几十亿个，并且各种类型的细菌和放线菌几乎都能分离到。如好气芽 孢杆菌、假单胞菌、短杆菌、大肠杆菌、某些嫌气菌等。但总的说来酵母菌分布土层最浅， 约5 ～10cm，霉菌和好氧芽孢杆菌也分布在浅土层。 2.土壤酸碱度和植被状况 土壤酸碱度会影响微生物种类的分布。偏碱的土壤（pH7.0 ～7.5）环境，适合于细菌、 放线菌生长。反之在偏酸的土壤（pH7.0 以下）环境下，霉菌、酵母菌生长旺盛。由于植物 根部的分泌物有所不同，因此，植被对微生物分布也有一定的影响。如番茄地或腐烂番茄堆 积处有较多维生素 C 生产菌。葡萄或其他果树在果实成熟时，其根部附近土壤中酵母菌数 量增多。豆科植物的植被下，根瘤菌数量比其他植被下占优势。 3 ．地理条件 南方土壤比北方土壤中的微生物数量和种类都要多，特别是热带和亚热带地区的土壤。 许多工业微生物菌种，如抗生素产生菌，尤其是霉菌、酵母菌，大多从南方土壤中筛选出来。 原因是南方温度高，温暖季节长，雨水多，相对湿度高，植物种类多，植被覆盖面大，土壤 有机质丰富，造成得天独厚的微生物生长环境。 4 ．季节条件 不同季节微生物数量有明显的变化，冬季温度低，气候干燥，微生物生长缓慢，数量最 少。到了春天随着气温的升高，微生物生长旺盛，数量逐渐增加。但就南方来说，春季往往 雨水多，土壤含水量高，通气不良，即使有微生物所需的温度、湿度，也不利于其生长繁殖。 随后经过夏季到秋季，约有7 ～10 个月处在较高的温度