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山西梁汾醋业有限公司
文件类别及编号： LF-GC-01 版次 共 页 第 页
菌落总数测定标准操作规程
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分发部门：
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菌落总数测定的标准操作规程
1. 目的
规范山西老陈醋菌落总数测定的操作规程，保证山西老陈醋产品的质量。
2. 适用范围
酿造食醋和配制食醋菌落总数的测定。
3. 仪器设备
恒温培养箱，冰箱，恒温水浴箱，天平（0.1g）,均质器，振荡器；无菌吸管1ml(0.01刻度)、10ml(0.1ml刻度)或微量移液器及吸头；无菌锥型瓶，250ml/500ml;
无菌培养皿：直径90mm；PH计或精密PH试纸；放大镜或菌落计数器
4.培养基和试剂
4.1平板计数琼脂培养基，
成分：
胰蛋白胨 5.0g
酵母浸膏 2.5g
葡萄糖 1.0g
琼脂 15.0g
蒸馏水 1000ml
PH7.0±0.2
制法：将上述加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节PH。分装试管或锥型瓶，121℃
4.2磷酸盐缓冲液
成分：
磷酸二氢钾（KH2PO4） 34.0g
蒸馏水 500ml
PH 7.2
制法：
贮存液：称取34.0g磷酸二氢钾溶于500ml蒸馏水中，用大约175ml的1mol/L氢氧化钠溶液调节PH,蒸馏水稀释至1000ml存于冰箱。
稀释液：取贮存液1.25ml,用蒸馏水稀释至1000ml,分装于适宜容器中，121摄氏度高压灭菌15分钟。
4.3无菌生理盐水
成分：
氯化钠 8.5g
蒸馏水 1000ml
制法：8.5克氯化钠溶于100ml蒸馏水中121摄氏度高压灭菌15分钟。
5 检验程序
报告
报告
计数各平板菌落数
计算菌落总数
培养
每皿中加入15ml-20ml
平板计数琼脂培养基，混匀
检样
25 g(mL)样品+225 mL稀释液，均质
10倍系列稀释
选择2-3个适宜稀释度的样品均液，
各取1ml分别加入无菌培养皿内
6操作步骤
6.1样品的稀释
6.1.1固体和半固体样品：称取25 g
6.1.2
6.1.3
6.1.4
6.1.5
6.1.6及时将15 mL～20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基（可放置于 46 ±1
6.2培养
6.2.1待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养48 h±2 h。水产品30℃±
6.2.2
6.3菌落计数
可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units，CFU）表示。
6.3.1
6.3.2
6.3.3
7结果与报告
7.1菌落总数的计算方法
7.1.1
7.1.2
N =∑C/(n1 +0.1n2 )d …………………………………（1）
式中：
N——样品中菌落数；
∑C——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；
n1——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；
n2——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；
d——稀释因子（第一稀释度）。
示例：
N =∑C/(n1 +0.1n2 )d
=(232+244+33+35)/[2+(0.1×2)]×10-2=544/0.022=24727
上述数据按1.6.2数字修约后，表示为25000或2.5×104。
7.1.3
7.1.4
7.1.5
7.1.6
7.2菌落总数的报告
7.2.1菌落数小于 100 CFU时，按“四舍五入”
7.2.2菌落数大于或等于100 CFU时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前 2位数字，后面用0代替位数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”
7.2.3
7.2.4
7.2.5
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