普鲁兰短梗霉hn2_3脂肪酶的生产_分离纯化_基因克隆跟表达的研究_.pdfVIP

1.3 脂肪酶活力的测定 用于检测脂肪酶活力常用的底物有：三油酸甘油酯和橄榄油。一般能水解三 油酸甘油酯的酶都是脂肪酶。但三油酸甘油酯的价格较贵，一般常用橄榄油代替， 它含有 70% 以上的油酸，且价格便宜来源广，在酶活力测定中被广泛使用。由于 橄榄油不溶于水而酶解反应只能在油一水界面上，为了使脂肪酶充分作用，常采 用在橄榄油中加聚乙烯醇或阿拉伯胶等乳化剂，用高速搅拌或超声波处理等措施 使油以微颗粒状态充分分散，使之成为均匀稳定的乳化液。测定反应中释放出的 游离脂肪酸，可用碱滴定法或与 NaHCO3 反应后测 CO2 压力，也可用电位滴定。 碱滴定法应用较为广泛，由底物、缓冲液和酶液组成的作用系统，在一定的 pH 和温度下保温一段时间后，用 95%的乙醇终止反应，加入指示剂，用标准碱液滴 定（何耀强等，2004 ）。 比色法也比较常见，以对硝基苯月桂酸酯（pNPL ）为底物的 pNPL 法（Winkler et al., 1979 ）是对硝基苯月桂酸酯在脂肪酶的催化作用下，分解生成月桂酸和对 硝基酚，利用对硝基酚在 410nm 光波下可被检测的性质，用吸光光度计来测定 底物分解产生得到的对硝基酚的量，从而换算出酶活的大小。 2 微生物脂肪酶的生产