第12章转基因、基敲除和RNA干涉.pptVIP

第十二章 基因敲除和RNA干涉 内容 第一节 基因敲除 基因敲除（gene knock-out）又称基因打 靶，通过外源DNA与染色体DNA之间的同源重 组，进行精确的定点修饰和基因改造，具有 专一性强、染色体DNA可与目的片段共同稳 定遗传等特点。 基因敲除技术与诺贝尔奖 基因敲除分为完全基因敲除和条件型基因敲 除（又称不完全基因敲除）两种。 完全基因敲除是指通过同源重组法完全消除 细胞或者动物个体中的靶基因活性，条件型 基因敲除是指通过定位重组系统实现特定时间和空间的基因敲除。 一、实现基因敲除的多种原理和方法 1 利用基因同源重组进行基因敲除 基因敲除是80年代后半期应用DNA同源重组原理发展起来的。80年代初，胚胎干细胞（ES细胞）分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。 1985年，首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础。 到1987年，Thompsson首次建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型。 直到现在，运用基因同源重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法。 步骤 基因载体的构建 ES 细胞的获得 同源重组 选择筛选已击中的细胞 表型研究 得到纯合体 1、条件性基因敲除法 条件性基因敲除法可定义为将某个基因的修饰限制于小鼠某些特定类型的细胞或发育的某一特定阶段的一种特殊的基因敲除方法