汉恒腺病毒载体操作手册指南.pdfVIP

腺病毒载体操作手册 腺病毒载体操作手册 一、实验流程 制备腺病毒穿梭质粒，分别高纯度无内毒素抽提腺病毒穿梭质 粒和骨架质粒，共转染293A细胞，转染后6h更换为完全培养基， 培 养十几天，在中间四五天左右更换一次新鲜培养基，然后收集细 胞和 1ml培液置于 15ml离心管后，液氮/37度冻融三次（冻-融要 彻底）， 2000rpm离心5分钟，取上清即为病毒液初代原液。连续三代反复 扩 增收集病毒后，行病毒的大量扩增，然后通过CsCl密度梯度离 心-透 析联用法纯化病毒。 二、实验材料 （一）腺病毒载体、包装细胞和菌株 该病毒包装系统为两质粒系统，组成为穿梭质粒（包括 pHBAd-CMV-IRES-GFP,pHBAd-CMV-IRES-RFP,pHBAd-U6-GFP, pHBAd-U6-RFP）和骨架质粒pBHGlox （delta）E1,3Cre。其中穿 梭质粒pHBAd-CMV-IRES-GFP和pHBAd-U6-GFP能表达绿色荧光 1 汉恒生物公司地址：上海市徐汇区斜土路 E-mail:service@ 1175号15楼 Tel：021 实验室地址：上海市张江高科技园区蔡伦路781弄张江药谷503 腺病毒载体操作手册 蛋白（GFP）。pHBAd-CMV-IRES-RFP和 pHBAd-U6-RFP能表达 红色荧光蛋白 （RFP）。 1、载体信息 1) 腺病毒克隆载体图谱如下： SacII SacII XbaI(456) (NotI ) XbaI(456) ( ) ITR ITR NotI U6 ITR ITR AgeI(731) r (AgeI(731) ) Amp U6 1 Ampr EcoRI(742)