病毒空斑纯化浅谈.pdfVIP

病毒空斑纯化 病毒蚀斑如同噬菌体的噬斑，一个蚀斑为一个病毒体的繁殖后代品系。在细胞培养中做蚀斑 是一种较精确的测定病毒感染的方法，将病毒各稀释度种入单层细胞瓶， 吸附1h，在单层 细胞上覆以营养琼脂培养基，病毒在细胞中繁殖使细胞死亡。但由于琼脂的限制只能感染临 近的细胞，形成“蚀斑”的退化细胞区，经中性红活细 胞染料着色后，活细胞显红色，而蚀 斑区细胞已退化步着色，形成不染色区域。凡是能在细胞培养物中产生CPE 的病毒都可以 采用蚀斑技术来分离和测定。 蚀斑技术在测定病毒感染时是很好的定量方法，也是测定干扰素和抗体中和病毒繁殖能 力的一种非常敏感的方法。此外还可以用来纯化病毒，纯化时挑选合适的空斑 进行传代即 可。若目的是要提高病毒能力，应选大空斑，若是为了减毒以制备疫苗应挑选小空斑，但每 瓶空斑数不得超过20-40个。 试验时，培养瓶应翻转培养，以防止水滴在琼脂面流动，以免各个蚀斑交叉融合，中性红应 在蚀斑出现前加入，在暗处孵育，以防止染料抑制病毒和破坏细胞。对那 些生长缓慢的病 毒蚀斑，中性红则不是加在最初的覆盖层里，而是加在经过几天培养后的最后一层覆盖层上， 可使培养物维持更久，甚至有的中间还得补加营养琼脂 覆盖层1-2次。 蚀斑使用的琼脂往往有少量抑制物而影响蚀斑的产生