微生物和免疫学试验(六)七年制.ppt

微生物与免疫学试验（六） 要求 讲解：肠道杆菌、霍乱弧菌、3种厌氧菌 示教片：肠道杆菌、霍乱弧菌、3种厌氧菌 示教平板：SS平板（肠道致病均和非致病均各一个）、双糖铁培养基（大肠、痢疾、伤寒、变形）、炭疽卷发样菌落； 其它示教：小生化反应（大肠、痢疾、伤寒、变形） 操作：肥达反应（注意标签贴试管上，不要贴到架子上） 录像：肠道杆菌 操作：肥达反应（试管凝集反应） 器材：试管6支/人，试管架1个/2人， 吸管1支/人，标签1个/人 已知： 伤寒H抗原、O抗原 （4人/组） 甲型副伤寒H抗原 乙型副伤寒H抗原 待检：病人血清（1：10稀释） 倍比稀释法 1 2 3 4 5 6 生理盐水 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 血清 0.5（吹打） 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5（弃） 菌液 0.5ml/管 ，从第6 1管加，振匀 水浴43度，2h 最终血清 1：40 1：80 1：160 1：320 1：640 对照 稀释度 凝集强弱 效价 *吸管 桶，试管 锅, 标签贴在试管上。 结果判断 以出现 凝集的血清最高稀释倍数为该血清抗体效价 O 达到1：80，H达到1：160 H甲（PA）或H乙（PB）达到1：80或以上有诊断意义 结合当地流行病学史、病程和抗体消长的意义进行判断。 肠道杆菌的鉴定 SS培养基 双糖铁培养基 生化反应表 炭疽杆菌 致病菌中最大的G＋粗大杆菌 ,两端平切、排列呈竹节状；有荚膜，芽胞在有氧条件下形成，呈椭圆形，位于菌体中央 厌氧菌 庖肉培养基 成分　　牛肉浸液　　　　　　　1000mL　　蛋白胨　　　　　　　　30g　　酵母膏　　　　　　　　5g　　磷酸二氢钠　　　　　　5g　　葡萄糖　　　　　　　　3g　　可溶性淀粉　　　　　　2g　　碎肉渣适量　　pH7.8制法　　1　称取新鲜除脂肪和筋膜的碎牛肉500g，加蒸馏水1000mL和1mol/L氢氧化钠溶液25mL，搅拌煮沸15min，充分冷却，除去表层脂肪，澄清，过滤，加水补足至1000mL。加入除碎肉渣外的各种成分，校正pH。　　2　碎肉渣经水洗后晾至半干，分装15mm×150mm试管约2～3cm高，每管加入还原铁粉0.1～0.2g或铁屑少许。将上述液体培养基分装至每管内超过肉渣表面约1cm。上面覆盖溶化的凡士林或液体石蜡0.3～0.4cm。121℃高压灭菌15min。 * 第6管 均匀混浊 ＋ 少量凝集 ＋＋ 细菌部分沉于管底，液体半澄清，凝集 呈颗粒状 ＋＋＋ 大部分凝集，液体轻度混浊，凝集块较大 ＋＋＋＋ 全部凝集，液体澄清，大片凝集块 O、H 正常值 感染可能性大 O、H 低 感染可能性小 O 不高 H 高 预防接种或非特异性回忆反应 O 高 H 不高 感染早期或交叉反应 类别 凝集效价 意义 大肠杆菌 伤寒杆菌 变形杆菌 痢疾杆菌 胆盐 枸橼酸盐 煌绿 乳糖 蛋白胨 中性红 抑制杂菌生长 被非致病菌分解产酸 被致病菌分解产碱 酸：红 碱：黄 Shigella-Salmonella medium 菌落红色——乳糖发酵阳性，非致病菌 菌落无色——乳糖发酵阴