中药中马兜铃酸含量的hplc测定及复方减毒效果的mla试验研究-hplc determination of aristolochic acid in traditional chinese medicine and mla experimental study of compound attenuation effect.docxVIP

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2018-09-10 发布于上海
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中药中马兜铃酸含量的hplc测定及复方减毒效果的mla试验研究-hplc determination of aristolochic acid in traditional chinese medicine and mla experimental study of compound attenuation effect

中药中马兜铃酸含量的 HPLC 测定及复方减毒效果的 MLA 试验研究摘要含马兜铃酸（Aristolochic Acid，AA）中药引起的马兜铃酸肾病（Aristolochic Acid Nephropathy，AAN）这一现象已引起了人们的广泛关注，而目前我国尚缺乏一套从细胞和分子遗传突变水平来评价含马兜铃酸中药毒性作用的检测体系。因此，本课题希望通过研究摸索出一套检测含马兜铃酸中药毒性作用的体系。为了建立从提取到检测含马兜铃酸中药毒性作用的整套流程，本课题首先采用高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography， HPLC）测定了八种中药中马兜铃酸的含量，并选定其中马兜铃酸含量较高的单方青木香和复方龙荟丸。然后利用“小鼠淋巴瘤细胞 L5178Y/TK+/- 致突变试验”（L5178Y/TK+/- Mouse Lymphoma Mutation Assay，MLA 简称小鼠淋巴瘤细胞试验）检测选定的这两种中药的细胞毒性和遗传毒性作用。从马兜铃酸含量的检测结果来看：八种中药中马兜铃酸含量在 0～ 4.72 mg/g，其中单方中药中青木香的马兜铃酸含量最高（3.11512 mg/g），而复方中龙荟丸最高（4.72044 mg/g）。该方法不仅简便，结果稳定，分离效果好，同时回收率、精密度、重现性均达到满意效果。小鼠淋巴瘤细胞试验结果表明，马兜铃酸浓度分别为 0、25、50、 100、200 μg/mL，单方青木香提取液对小鼠淋巴瘤 L5178Y3.7.2c-tk+/-细胞（简称小鼠淋巴瘤细胞）造成的 tk 基因突变频率为：115.3×10－6、303.1 ×10－6、632.4×10－6、1346.2×10－6、2972.3×10－6；而复方龙荟丸提取液的结果依次为：115.3×10－6、122.9×10－6、237.2×10－6、586.7×10－6、 1150.8×10－6。相对存活率（RS），相对悬浮增长率（RSG），相对总增长率（RTG）这些细胞毒性指标都与青木香和龙荟丸提取液中马兜铃酸浓度呈反向关系。这些说明青木香和龙荟丸对小鼠淋巴瘤细胞的细胞毒性和遗传毒性作用都随提取液中马兜铃酸浓度的增加而加强。另外，实验研究中发现复方龙荟丸提取液的细胞毒性和遗传毒性作用明显低于单方青木香提取液，说明复方可能有减毒效果，有待进一步探讨。综上，本课题初步建立起了一套利用高效液相色谱技术和小鼠淋巴瘤细胞试验检测含马兜铃酸中药毒性作用的体系，为下一步探索中药复方减毒规律奠定了基础。关键词：青木香，龙荟丸，高效液相色谱，马兜铃酸，小鼠淋巴瘤细胞试验 DETERMINATION OF ARISTOLOCHIC ACIDS BY HPLC AND STUDIES ON TOXICITY-REDUCED EFFECT BY MLA IN TCM ABSTRACT Aristolochic Acid Nephropathy (AAN), which is caused by intake of traditional Chinese medicines (TCM) containing aristolochic acids (AA), has gained wide concern throughout the world. However, a method to systemically and properly estimate the toxicity and the risk of TCM containing AA in a cytogenetic and molecular scale needs establishing in our country. Therefore, it is aimed to launch the establishment of such a method in this research. For this purpose, firstly, High Performance Liquid Chromatography (HPLC) was applied to quantify the content of AA in the extracts of 8 prescripts of TCM. And among them, single recipe Radix aristolochiae and compound recipe Longhui Pill were chosen to test their cell toxicity and genotoxicity respective