超氧化物歧化酶提取分离及应用.docVIP

超氧化物歧化酶提取分离及应用 （Superoxide dismutase,SOD,Superoxide oxidoreductase, EC 1.15.1.1) SOD是一种新型酶制剂，属金属酶。分布很广，几乎从哺乳动物到细菌，以及植物中均存在。正常情况下仅存在于细胞溶质中。存在于高等动物的红细胞、肝、脑组织中。在微生物中主存于需氧菌。SOD是催化超氧阴离子（O2-）歧化反应的酶类。它的存在与生物体内的解毒作用有关，也发现与机体的衰老、肿瘤及免疫性疾病等有关。因而受到医药界的关注。目前中国国内已进入临床试验阶段。 超氧离子是氧分子获得一个电子而形成的负一价自由基。在生物体内它可产生于某些酶的酶促反应过程中，如黄嘌呤氧化酶、醛氧化酶、二氢乳清脱氢酶、半乳糖氧化酶、色氨酸二氧酶及黄素蛋白脱氢酶类所催化的反应。在儿茶酚胺、氢醌、肾上腺素、巯基基团四氢喋呤等物质的氧化过程中也产生并释放出超氧离子。另外，在生物体遭受电离辐射时，在吞噬细胞吞噬消灭外来微生物的过程中，都会产生大量的超氧离子。所以，在需氧生物体内，随时都有大量的超氧离子生成。 超氧离子具有较高的化学活性，对生物细胞具有一定的毒性。它可与过氧化氢反应，生成毒性更强的羟基自由基（·OH）。超氧离子与羟基自由基进攻生物膜，可改变膜的结构和通透性；进攻染色体，可使染色体降解、断裂。它们还可攻击许多细胞内成分，使其失去生物活性和功能。所以，如果生物体内或某一组织中超氧离子含量异常高，就会引起疾病，甚至死亡。幸而，生物体内的超氧化物歧化酶在高速清除机体内随时产生的超氧离子。 一、提取分离 SOD的制备方法随原料而异。目前国际上制备SOD的原料有：动物血、微生物和动物组织。作为药物大都是以血球为原料提取Cu·Zn-SOD，即使以富含Mn-SOD的牛肝为原料，在生产中也要通过螯金属离子制成Cu·Zn-SOD。目前中国动物血如牛、羊、猪血大都未被利用，如若综合利用动物血中提取SOD，则具有一定实际意义。 二、活性及应用 目前一般认为生物体利用分子氧的第1步是通过NADH（还原型辅酶Ⅰ）或NADPH（还原型辅酶Ⅱ），在超氧阴离子合成酶作用下首先形成O2-·，然后再发生一系列氧化反应。分子氧本身毒性很低，但它的还原产物活性氧对细胞毒性却很大，由于活性氧能使体内的成分氧化，因此造成一定的生物损害。在生物体内产生O2-·的途径很多，如黄嘌呤氧化酶、酵母t-RNAlys连接酶、吞噬多形核细胞、FMN、IgA、IgG、表面活性剂PMA、高能辐射以及卡红霉素、斯帖菲霉素、丝裂霉素C和争光霉素等抗生素都能产生O2-·。尽管生物体在无时无刻地产生O2-·，但由于细胞内存在一种高效的“清除剂”——SOD，因此生物体仍能维持正常的生理功能。在病理的情况下能否通过补充外源的SOD达到防病治病的效果这是大家所关注的，虽然这方面报道较多，但大多数仅处在动物试验阶段。 生物体内不少病理过程都能产生超氧离子。首先应了解超氧离子在各种氧-氧键中的地位，氧-氧键共有4种。 超氧离子的产生 超氧离子对人体的毒性很大，对细胞的破坏力极强。不少疾病对人体的致命性，产生超氧化物也是原因之一。以下几方面能产生超氧离子： 发炎 不少炎症已证实能产生超氧离子，如类风湿性关节炎、骨关节炎、腿部水肿等。肺炎、肺水肿由于处于富氧的肺部，更易产生超氧离子。 电离辐谢 机体经电离辐射后会产生有毒的超氧离子，这是辐照病（放射病）的致命原因之一。 据Pethan等人报道，SOD可提高辐照动物的存活率，Huber等人报道每天注射2mg/kg的SOD可降低自身免疫鼠的抗体滴度；Robbins等人报到每天静注105μg/g可抵抗由SOD抑制剂链脲佐菌素所引起鼠的糖尿病；Leuthauser和Larry等人初步证明无论单次静注或肌注SOD，均能延长患有腹水癌鼠的寿命。 超氧化物歧化酶近年来在国际上受到广泛的重视，这是因为它可以作为治疗酶，对不少较为难治的病有一定的疗效。国外从牛红细胞中制得的超氧化物歧化酶。其商品名为Orgotein。不少人研究Orgotein的药理性质，证明它无毒，无抗原性，能抗发炎、抗超氧离子、抗病毒感染。作为治疗酶的超氧化物歧化酶有以下功能。 对自身免疫性疾病的治疗作用 SOD对自身免疫性疾病一般均有疗效。例如Crohns疾病也称回肠结肠炎。这是一种肠道自身免疫性疾病，极为顽固。但有不少例子说明经过每天500mg剂量的SOD处理（皮下注射）2个月内症状消失。 胶原性的自身