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NOESY 生物大分子波谱学原理 吴季辉 * yrty NOESY 生物大分子波谱学原理 吴季辉 * yrty 第六章 同核核磁实验方法 COSY型实验 多量子谱 TOCSY NOESY ROESY 生物大分子波谱学原理 吴季辉 * yrty ROESY 生物大分子波谱学原理 吴季辉 由于实验室坐标系中的交叉弛豫速率在小分子为正，在大分子为负，在中间大小的分子如小肽接近零，因此小肽的NOE交叉峰非常弱乃至消失。在这种情况下要得到残基间的关联信息可以利用ROESY实验。ROESY实验检测旋转坐标系中的交叉弛豫速率，同NOE不同，ROE在所有相关时间下均为正，因此即使NOE峰消失，ROE峰仍能产生。 * yrty ROESY 生物大分子波谱学原理 吴季辉 * yrty tyuyt utyu tyuyt utyu tyuyt utyu tyuyt utyu tyuyt utyu tyuyt utyu tyuyt utyu tyuyt utyu tyuyt utyu TOCSY 生物大分子波谱学原理 吴季辉 全相关谱TOCSY(total correlation spectroscopy)也称HOHAHA (homonuclear Hartmann-Hahn spectroscopy)，可以提供整个自旋体系的信息。 * yrty TOCSY 生物大分子波谱学原理 吴季辉 * yrty TOCSY Positive and absorptive diagonal cross peaks for Z-filtered anisotropic TOCSY MLEV-17 Spin Lock Product Operator: * yrty TOCSY 生物大分子波谱学原理 吴季辉 * yrty TOCSY 生物大分子波谱学原理 吴季辉 在TOCSY中用的混合脉冲有很多种类，如WALTZ-16,MLEV-17,DIPSI-2,DIPSI-3等，不同的isotropic mixing sequence的效率不同，适合的谱宽也不同。 在混合脉冲期间还有ROE效应，因此有的TOCSY序列中的混合脉冲包括一定的间隔，在无脉冲的间隔中没有ROE效应，但有NOE效应，由于蛋白质等大分子有ROE＝－2NOE，这样适当选取间隔长度，可使二者基本抵销。这种TOCSY序列称为Clean-TOCSY。 * yrty TOCSY 生物大分子波谱学原理 吴季辉 C 实验及处理 同相谱与COSY等反相谱不同，间接维的点数不必很大，一般512点足够。 混合时间的选择与要求的传递距离有关，传递距离越长，需要的时间越长，一般短的可取20-30ms，长的可取100ms左右。要注意：混合脉冲所用的功率不能太大，尤其混合时间较长的。否则可能损坏放大器及探头，另外混合脉冲产生的热量将使样品发热，使得TOCSY的峰位同其他谱相比发生位移。 由于TOCSY是同相谱，一般用相移60－90度的正弦窗函数。 * yrty TOCSY 生物大分子波谱学原理 吴季辉 * yrty TOCSY 生物大分子波谱学原理 吴季辉 D 应用 TOCSY可提供整个自旋体系的连接，而且信号强，对于谱峰证认很有用。 * yrty TOCSY-wagergate 生物大分子波谱学原理 吴季辉 预饱和， 低功率选择性90脉冲（对准水峰） * yrty TOCSY-doublewagergate 生物大分子波谱学原理 吴季辉 d1恢复前梯度脉冲清除残留磁化，两个WATERGATE以改善基线 * yrty TOCSY-enhance mode 生物大分子波谱学原理 吴季辉 180度脉冲 * yrty 第六章 同核核磁实验方法 COSY型实验 多量子谱 TOCSY NOESY ROESY 生物大分子波谱学原理 吴季辉 * yrty Selection of NOESY and ROESY ~1000 ~3000 * yrty NOESY 生物大分子波谱学原理 吴季辉 * yrty NOESY 生物大分子波谱学原理 吴季辉 * yrty NOESY Mixing time: ~80% of T1 * yrty NOESY 生物大分子波谱学原理 吴季辉 * yrty NOESY 生物大分子波谱学原理 吴季辉 * yrty NOESY 生物大分子波谱学原理 吴季辉 * yrty NOESY 生物大分子波谱学原理 吴季辉 C 实验及处理 同TOCSY类似，间接维的点数不必很大，但考虑到NOESY积分的要