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第一章 蛋白质的分离与纯化 第一章 蛋白质的分离与纯化 第一章 蛋白质的分离与纯化 色谱流出曲线 色谱流出曲线和色谱峰 基线（a） 峰高（h） 保留值 死时间t0 不被固定相吸附或溶解的物质进入色谱柱时，从进样到出现峰极大值所需的时间称为死时间，它正比于色谱柱的空隙体积，如下图。 3. 调整保留时间tr′ 某组分的保留时间扣除死时间后，称为该组分的调整保留时间，即 tr′= tr ? t0 由于组分在色谱柱中的保留时间tr包含了组分随流动相通过柱子所须的时间和组分在固定相中滞留所须的时间，所以tr实际上是组分在固定相中保留的总时间。 保留时间是色谱法定性的基本依据，但同一组分的保留时间常受到流动相流速的影响，因此色谱工作者有时用保留体积来表示保留值。 4. 死体积V0 指色谱柱在填充后，柱管内固定相颗粒间所剩留的空间、色谱仪中管路和连接头间的空间以及检测器的空间的总和。当后两相很小可忽略不计时，死体积可由死时间与色谱柱出口的载气流速Fco（cm3·min-1）计算。 V0 = t0Fco 式中 Fco为扣除饱和水蒸气压并经温度校正的流速。 仅适用于气相色谱，不适用于液相色谱